Question

15．（1）在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)一種廣泛使用的除草劑（含氮有機(jī)化合物）在土壤中不易降解，長期使用可污染土壤．為修復(fù)被該除草劑污染的土壤，需要選育能高效降解該除草劑的細(xì)菌．
請(qǐng)完成下列選育的實(shí)驗(yàn)方案：
步驟一：菌種浸出液的制備：
從使用過除草劑的土壤中獲取一定量的樣本，然后置于無菌水中，震蕩一定時(shí)間，備用．
步驟二：配置菌種選育培養(yǎng)基并滅菌：
所配制的培養(yǎng)基的特點(diǎn)是固體 和含不同濃度除草劑．
步驟三：
①劃線接種
②在適宜的溫度等條件進(jìn)行倒置培養(yǎng)一定時(shí)間．
③觀察選取在較高濃度下除草劑的培養(yǎng)基中大菌落．
（2）某同學(xué)在純化菌株時(shí)，劃線接種后一段時(shí)間后，平板的第一劃線區(qū)域長滿致密的菌苔，第二劃線區(qū)域無菌落，造成劃線無菌落可能的操作失誤是接種環(huán)灼燒后未冷卻或接種劃線未從第一區(qū)域開始．

Answer 1

分析 1、平板劃線的操作的基本步驟是：
（1）右手持接種環(huán)，經(jīng)火焰滅菌，待涼后，在火焰旁打開盛有菌液的試管棉塞，并將試管口過火焰，將以冷卻的接種環(huán)伸入菌液，沾取一環(huán)菌液，將試管口過火焰丙塞上棉塞．
（2）左手斜持瓊脂平板，皿蓋打開一條縫，右手于火焰近處將接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋，接種環(huán)不應(yīng)劃破培養(yǎng)基表面．
（3）燒灼接種環(huán)，殺滅環(huán)上殘留菌液，待冷卻（是否冷卻，可先在培養(yǎng)基邊緣處試觸，若瓊脂溶化，表示未涼，稍等再試），從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)內(nèi)劃線，重復(fù)以上操作，在第三四五區(qū)內(nèi)劃線，注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連．
（4）將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)．
2、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落．
3、消毒和滅菌

	消毒	滅菌
概念	使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法	灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌
適用對(duì)象	操作空間、某些液體、雙手等	接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等

解答 解：（1）步驟一：由于該除草劑為含氮有機(jī)物，所以篩選能高效降解該除草劑的細(xì)菌，應(yīng)在使用過除草劑的土壤取樣，并使用含該除草劑為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基．
步驟二：所配制的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基并需要配置含不同濃度除草劑的培養(yǎng)基．
步驟三：①劃線接種．
②接種后應(yīng)該進(jìn)行培養(yǎng)，即在適宜的溫度等條件進(jìn)行倒置培養(yǎng)一定時(shí)間．
③觀察選取在較高濃度下除草劑的培養(yǎng)基中大菌落．
（2）根據(jù)題意分析，該同學(xué)的失誤是接種環(huán)灼燒后未冷卻造成菌種燙死，或接種劃線未從第一區(qū)域開始，這樣會(huì)導(dǎo)致二次劃線起始時(shí)就沒有菌種．
故答案為：
（1）使用過除草劑的土壤     固體   含不同濃度除草劑
②在適宜的溫度等條件進(jìn)行倒置培養(yǎng)一定時(shí)間
③觀察選取在較高濃度下除草劑的培養(yǎng)基中大菌落
（2）接種環(huán)灼燒后未冷卻或接種劃線未從第一區(qū)域開始

點(diǎn)評(píng) 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識(shí)記無菌技術(shù)；識(shí)記培養(yǎng)基的成分、類型及功能；識(shí)記接種微生物常用的兩種方法，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題．