Question

13．研究人員在培育轉bt基因抗蟲番茄過程中，選用hpt（抗潮霉素基因）為標記基因．為了提高轉基因番茄的安全性，在篩選成功后，用Cre酶（能特異識別loxp位點，切除loxp位點間的基因序列）切除hpt．相關技術流程如圖．

（1）步驟①中，為防止原番茄植株帶有病毒，應選用分生組織（或莖尖或根尖或芽尖）作為外植體；培養(yǎng)時，常在培養(yǎng)基中加入2，4-D，其作用是誘導形成愈傷組織（或誘導脫分化）．
（2）步驟②將bt基因導入愈傷組織的最常用方法是農桿菌轉化法．
（3）步驟③需在培養(yǎng)基中加入潮霉素以初步篩選出轉入bt基因的植株．
（4）提取F1植株的基因組DNA，用hpt特異性引物進行PCR．其中，植株1和2的PCR產物電泳結果如上圖，據此判斷，植株2為不具有hpt的抗蟲番茄．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示表示轉bt基因抗蟲番茄的培育過程，其中①表示脫分化過程，②表示將目的基因導入受體細胞，③表示再分化和篩選過程，最后還要用Cre酶（能特異識別loxp位點，切除loxp位點間的基因序列）切除hpt．據此答題．

解答 解：（1）由于植物分生區(qū)附近的病毒極少，甚至無病毒，因此步驟①中，為防止原番茄植株帶有病毒，應選用分生組織（或莖尖或根尖或芽尖）作為外植體；該步驟所用的培養(yǎng)基中要加入2，4-D，其作用是誘導形成愈傷組織（或誘導脫分化）．
（2）將目的基因導入植物細胞常用農桿菌轉化法，因此步驟②將bt基因導入愈傷組織的最常用方法是農桿菌轉化法．
（3）由圖可知，抗性基因是潮霉素抗性基因，因此步驟③需在培養(yǎng)基中加入潮霉素以初步篩選出轉入bt基因的植株．
（4）提取F1植株的基因組DNA，用hpt特異性引物進行PCR．其中，植株1出現PCR產物，說明其具有hpt，而植株2沒有出現PCR產物，說明其不具有hpt．因此，植株2為不具有hpt的抗蟲番茄．
故答案為：
（1）分生組織（或莖尖或根尖或芽尖）誘導形成愈傷組織（或誘導脫分化）
（2）農桿菌轉化法
（3）潮霉素
（4）2

點評 本題結合轉bt基因抗蟲番茄的培育過程圖解，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中的相關細節(jié)，能結合題中和圖中信息準確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．