Question

3．Rag₂基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細胞．科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag₂基因缺失小鼠進行基因治療，其技術(shù)流程如圖．請回答：

（1）在上皮細胞進行培養(yǎng)時，應(yīng)使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶將細胞分散開制成細胞懸液，培養(yǎng)基的成分除無機鹽、糖、氨基酸、核苷酸微量元素等營養(yǎng)成分外通常還需要加入血清、血漿．為了防止培養(yǎng)過程中的污染，細胞培養(yǎng)液中需添加一定量的抗生素；為了便于清除代謝產(chǎn)物，防止細胞產(chǎn)物的積累對細胞自身造成危害，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液．
（2）核移植的受體卵母細胞應(yīng)培養(yǎng)至MII中期，此時應(yīng)先去除卵母細胞的細胞核．
（3）ES細胞可由囊胚的內(nèi)細胞團分離培養(yǎng)獲得，它的功能特點是發(fā)育的全能性，人類可以對其進行誘導(dǎo)分化形成造血干細胞．
（4）基因?qū)�入之前必須�?gòu)建基因表達載體，基因表達載體的組成要有目的基因、啟動子和終止子、標記基因等．
（5）該治療方式屬于體外（體內(nèi)、體外）基因治療．

Answer 1

分析 1、動物核移植的概念：將動物的一個細胞的細胞核移入一個去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體．
2、胚胎干細胞簡稱ES或EK細胞，來源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內(nèi)細胞團）．
3、在基因工程中，目的基因和質(zhì)粒需要用同種限制酶進行切割，形成相同的黏性末端，再用DNA連接酶連接成重組質(zhì)粒．
4、目的基因分子水平上的檢測：
①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)
②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)
③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)
分析題圖：圖示是利用胚胎干細胞（ES細胞）對干擾素基因缺失小鼠進行基因治療的流程，其中①表示獲得重組胚胎的過程；②表示早期胚胎培養(yǎng)過程；③表示采用基因工程技術(shù)將目的基因?qū)�入受體細胞．

解答 解：（1）在利用上皮細胞進行細胞培養(yǎng)時，可用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，以消化組織細胞間的蛋白質(zhì)，得到單個細胞．營養(yǎng)物質(zhì)除了糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)．為了防止細胞培養(yǎng)過程中細菌的污染，可向培養(yǎng)液中加入適量的抗生素．為了便于清除代謝產(chǎn)物，防止細胞產(chǎn)物的積累對細胞自身造成危害，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液．
（2）動物體細胞核移植的受體細胞是處于減數(shù)第二次分裂中期（MII中期）的卵母細胞，且要去除其細胞核．
（3）重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期時，可從其內(nèi)細胞團中分離出ES細胞．ES細胞具有發(fā)育的全能性，人類可以對其進行誘導(dǎo)分化形成造血干細胞．
（4）基因表達載體由啟動子、終止子、標記基因和目的基因組成．
（5）根據(jù)圖形分析可知該治療方式屬于體外基因治療．
故答案為：
（1）胰蛋白酶或膠原蛋白酶  血清、血漿    抗生素  培養(yǎng)液
（2）MII中   細胞核
（3）內(nèi)細胞團  發(fā)育的全能性   誘導(dǎo)分化
（4）標記基因   啟動子   體外

點評 本題結(jié)合利用胚胎干細胞（ES細胞）對干擾素基因缺失小鼠進行基因治療的流程圖，綜合考查基因工程、細胞工程和胚胎工程的相關(guān)知識，要求考生識記細胞工程的操作步驟及相關(guān)細節(jié)；識記核移植技術(shù)的過程及應(yīng)用；識記胚胎干細胞的來源及特點，能結(jié)合所學(xué)的知識準確答題．