Question

【題目】某生物興趣小組試圖探究牛和山羊的瘤胃中的微生物對(duì)尿素是否有分解作用，設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)，并成功篩選到能降解尿素的細(xì)菌（目的菌）。培養(yǎng)基成分如左表所示，實(shí)驗(yàn)步驟如圖所示。請(qǐng)分析回答問題：

（1）從培養(yǎng)基的物理性質(zhì)分析，該培養(yǎng)基屬于_____________；從培養(yǎng)基的用途分析，該培養(yǎng)基屬于_____________。

（2）在實(shí)驗(yàn)過程中：①培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿；②玻棒、試管、錐形瓶、吸管；③瘤胃中液體；④涂布器。其中需要滅菌是_____________（填序號(hào)）。

（3）分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，甲同學(xué)從培養(yǎng)基上篩選出大約150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個(gè)菌落。甲同學(xué)堅(jiān)信自己的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是準(zhǔn)確的，則甲同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生差異的原因最可能是____________

（填序號(hào)）

①取樣不同 ②培養(yǎng)基污染 ③操作失誤 ④沒有設(shè)置對(duì)照

（4）為確定實(shí)驗(yàn)中微生物屬于尿素分解菌，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若菌落變成__________色，說明瘤胃中的微生物能分解酵素。理由是______________________________。

（5）為進(jìn)一步確定取自瘤胃中液體的適當(dāng)稀釋倍數(shù)，將接種的培養(yǎng)皿放置在37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h～48h，觀察并統(tǒng)計(jì)具有紅色環(huán)帶的菌落數(shù)，結(jié)果如下表，其中___________倍的稀釋比較合適。

（6）若要在如圖實(shí)驗(yàn)中對(duì)瘤胃中的目的菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，應(yīng)采用什么計(jì)數(shù)法？___________________，該方法的缺點(diǎn)是容易導(dǎo)致結(jié)果偏小，請(qǐng)寫出結(jié)果偏小的原因_______________________________。（寫出一項(xiàng)即可）

Answer 1

【答案】 固體培養(yǎng)基 選擇培養(yǎng)基 ①、②、④ ① 紅 細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，PH增高，使酚紅指示劑變紅 106或105 活菌計(jì)數(shù)法 兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞可能共同形成一個(gè)菌落，導(dǎo)致結(jié)果偏�。ㄒ恍┘�(xì)菌在培養(yǎng)過程中死亡后，不能形成菌落，導(dǎo)致結(jié)果偏小）

【解析】（1）分析培養(yǎng)基的成分組成可知，有凝固劑——瓊脂，說明該培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基。該實(shí)驗(yàn)的目的是篩選到能高效降解尿素的細(xì)菌，因此培養(yǎng)基中加入尿素的目的是能高效降解尿素的細(xì)菌（目的菌），不能分解尿素的細(xì)菌將因缺少氮源無法生長(zhǎng)繁殖，因此從功能上看，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。

（2）為了保證培養(yǎng)物不被污染，對(duì)培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿和玻璃棒、試管、錐形瓶和吸管要進(jìn)行滅菌，實(shí)驗(yàn)操作者的雙手要進(jìn)行消毒，但實(shí)驗(yàn)所需的目的菌來源于瘤胃中液體，不能滅菌，其余的都需要滅菌和消毒，所以選擇①、②、④。

（3）由題意知，該同學(xué)與其他同學(xué)獲得的菌落數(shù)差異很大，可能的原因是采用的取樣不同，培養(yǎng)基滅菌不徹底，培養(yǎng)基被污染；或者是實(shí)驗(yàn)過程中沒有進(jìn)行無菌操作，如果甲同學(xué)操作是正確的，則最可能的原因是取樣不同。

（4）尿素被分解尿素的菌氧化成氨氣，氨氣會(huì)使培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，PH升高，指示劑酚紅變紅，因此以通過在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，檢測(cè)培養(yǎng)基pH的變化來判斷尿素是否被分解。

（5）觀察并統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)應(yīng)選30-300之間的進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，故應(yīng)選106或105倍的稀釋比較合適。

（6）對(duì)瘤胃中的活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，應(yīng)采用活菌計(jì)數(shù)法。該方法的缺點(diǎn)是容易導(dǎo)致結(jié)果偏小，原因是兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞可能共同形成一個(gè)菌落或者一些細(xì)菌在培養(yǎng)過程中死亡后，不能形成菌落，導(dǎo)致結(jié)果偏小。