Question

17．埃博拉病毒（EBOV）是一種能引起人類和靈長類動物發(fā)生埃博拉出血熱（EBHF）的烈性病毒，利用相應的生物學技術制備出抗EBOV的單克隆抗體，可快速檢測EBOV．請回答下列問題：
（1）方法一：給小鼠注射純化的EBOV蛋白，一段時間后，從小鼠的脾臟中獲取漿細胞，將獲得的漿細胞與小鼠的骨髓瘤細胞融合，再經(jīng)過至少兩次篩選、檢測，最終可獲得所需的雜交瘤細胞．
（2）方法二：科學家從細胞中分離出無限增殖基因（prG），可將prG基因導入能產(chǎn)生抗EBOV抗體的小鼠漿細胞中，導入prG基因的漿細胞具有既能無限增殖，又能產(chǎn)生抗EBOV的（特異性或專一性或所需的）抗體的特點．
（3）以上兩種方法獲得的雜交瘤細胞或帶有prG基因的漿細胞，可在無菌、無毒的環(huán)境、營養(yǎng)、適宜的溫度和pH和一定的氣體環(huán)境等條件下進行體外培養(yǎng)，以便源源不斷的產(chǎn)生抗EBOV的單克隆抗體．
（4）方法二中，若用PCR擴增方法獲取目的基因，則需要用到耐高溫的DNA聚合（或“Taq”）酶，該方法能夠成功獲取目的基因的前提是要有一段已知的目的基因核苷酸序列，以便合成引物．

Answer 1

分析 1、基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．（3）將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細胞；誘導B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；進行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞；進行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體．

解答 解：（1）制備單克隆抗體時，首先給小鼠注射抗原，然后從小鼠的脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B細胞，然后與小鼠的骨髓瘤細胞融合，再經(jīng)過至少兩次篩選（第一次是用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，第二次篩選是用抗體陽性檢測法篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞）、檢測，最終可獲得所需的雜交瘤細胞．
（2）漿細胞能產(chǎn)生抗體，但不能無限增殖，prG基因使細胞無限增殖，因此導入prG基因的漿細胞具有的特點是既能無限增殖，又能產(chǎn)生抗EBOV的（特異性或專一性或所需的）抗體．
（3）動物細胞培養(yǎng)需要的條件為：無菌、無毒的環(huán)境、營養(yǎng)、適宜的溫度和pH和一定的氣體環(huán)境等．
（4）PCR技術是在較高溫度條件下進行的，因此該過程需要用到耐高溫的DNA聚合（或“Taq”）酶；該方法能夠成功獲取目的基因的前提是要有一段已知的目的基因核苷酸序列，以便合成引物．
故答案為：
（1）脾臟      骨髓瘤     篩選
（2）既能無限增殖，又能產(chǎn)生抗EBOV的（特異性或專一性或所需的）抗體
（3）無菌、無毒      溫度和pH
（4）耐高溫的DNA聚合（或“Taq”）        一段已知的目的基因核苷酸序列    引物

點評 本題考查基因工程、單克隆抗體的制備等知識，要求考生識記基因的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)；識記單克隆抗體的制備過程，能結合所學的知識準確答題．