Question

【題目】GDNF是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子．對損傷的神經(jīng)細胞具有營養(yǎng)和保護作用．研究人員構建了含GDNF基因的表達載體（如圖1所示），并導入到大鼠神經(jīng)干細胞中，用于干細胞基因治療的研究．請回答：

（1）在分離和培養(yǎng)大鼠神經(jīng)干細胞的過程中，使用胰蛋白酶的目的是 ．

（2）構建含GDNF基因的表達載體時，需選擇圖1中的 限制酶進行酶切．

（3）經(jīng)酶切后的載體和GDNF基因進行連接，連接產(chǎn)物經(jīng)篩選得到的載體主要有三種：單個載體自連、GDNF基因與載體正向連接、GDNF基因與載體反向連接（如圖1所示）．為鑒定這3種連接方式，選擇HpaI酶和BamHI酶對篩選的載體進行雙酶切，并對酶切后的DNA片段進行電泳分析，結果如圖2所示．圖中第 泳道顯示所鑒定的載體是正向連接的．

（4）將正向連接的表達載體導入神經(jīng)干細胞后，為了檢測GDNF基因是否成功表達，可用相應的 與提取的蛋白質雜交．當培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞達到一定的密度時，需進行 培養(yǎng)以得到更多數(shù)量的細胞，用于神經(jīng)干細胞移植治療實驗．

Answer 1

【答案】（1）使細胞分散開

（2）XhoⅠ

（3）②

（4）抗體 傳代

【解析】試題分析：（1）動物細胞培養(yǎng)時，可用胰蛋白酶或膠原蛋白酶作用，使細胞分散開．

（2）質粒上有XhoⅠ識別位點，而且在啟動子之后，所以選用XhoⅠ限制酶進行酶切．

（3）泳道①僅有一種條帶，屬于載體自連；泳道②有兩種條帶，且長度分別與質粒和GDNF基因長度相同，為正向連接；泳道③有兩種條帶，長度與BamHⅠ酶切后結果相同，為反向連接．

（4）檢測基因是否表達采用抗原抗體雜交法．培養(yǎng)動物細胞采用動物細胞培養(yǎng)法，當細胞密度達到一定程度，需要進行分瓶，進行傳代培養(yǎng)．

故答案為：（1）使細胞分散開

（2）XhoⅠ

（3）②

（4）抗體 傳代