Question

2008年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)授予了三位在研究綠色熒光蛋白（GFP）方面做出突出貢獻(xiàn)的科學(xué)家．綠色熒光蛋白能在藍(lán)光或紫外光的激發(fā)下發(fā)出熒光，這樣借助GFP發(fā)出的熒光就可以跟蹤蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)部的移動(dòng)情況，幫助推斷蛋白質(zhì)的功能．下圖為我國(guó)首例綠色熒光蛋白（GFP）轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過(guò)程示意圖，據(jù)圖回答：

（1）圖中通過(guò)過(guò)程①、②形成重組質(zhì)粒，需要限制性?xún)?nèi)切酶切取目的基因、切割質(zhì)粒．限制性?xún)?nèi)切酶Ⅰ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是﹣G↓GATCC﹣，限制性?xún)?nèi)切酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是﹣↓GATC﹣．在質(zhì)粒上有酶Ⅰ的一個(gè)切點(diǎn)，在目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)酶Ⅱ的切點(diǎn)．

①請(qǐng)畫(huà)出質(zhì)粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端．

②在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接？

理由是 ．

（2）過(guò)程③將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞時(shí)，采用最多也最有效的方法是 ．

（3）如果將切取的GFP基因與抑制小豬抗原表達(dá)的基因一起構(gòu)建到載體上，GFP基因可以作為基因表達(dá)載體上的標(biāo)記基因，其作用是 ．獲得的轉(zhuǎn)基因克隆豬，可以解決的醫(yī)學(xué)難題是，可以避免 ．

（4）目前科學(xué)家們通過(guò)蛋白質(zhì)工程制造出了藍(lán)色熒光蛋白，黃色熒光蛋白等，采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造出藍(lán)色熒光蛋白過(guò)程的正確順序是： （填序號(hào)）．

①推測(cè)藍(lán)色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸

②藍(lán)色熒光蛋白的功能分析和結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)序列

③藍(lán)色熒光蛋白基因的修飾（合成）

④表達(dá)出藍(lán)色熒光蛋白．

Answer 1