Question

【題目】腸出血性大腸桿菌是能導(dǎo)致人體患病的為數(shù)不多的幾種大腸桿菌中的一種，人體感染該種大腸桿菌后的主要癥狀是出血性腹瀉，感染嚴(yán)重者可出現(xiàn)溶血性尿毒綜合征( HUS)，危及生命。該大腸桿菌在血平板（培養(yǎng)基中添加適量血液）上生長(zhǎng)時(shí)，可破壞菌落周圍的紅細(xì)胞，使其褪色，從而形成透明圈。下圖為從被腸出血性大腸桿菌污染的食物中分離和提純?cè)摯竽c桿菌的操作流程示意圖。請(qǐng)回答下列相關(guān)問(wèn)題：

（1）肉湯培養(yǎng)基可為培養(yǎng)的微生物提供的營(yíng)養(yǎng)成分包括____。

（2）以上操作中在血平板上的接種方法是________；第一次接種操作前和整個(gè)接種操作結(jié)束后均需要對(duì)接種工具進(jìn)行灼燒滅菌，其目的分別是 ___和____。

（3）為了進(jìn)一步研究該大腸桿菌的抗原性，常利用 ___法分離其蛋白質(zhì)，若甲蛋白質(zhì)比乙蛋白質(zhì)后洗脫出來(lái)，則相對(duì)分子質(zhì)量較大的是____。在裝填凝膠柱時(shí)，不得有氣泡產(chǎn)生，是因?yàn)?/span>________________

Answer 1

【答案】碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽等 平板劃線法 殺死接種環(huán)上的微生物避免污染培養(yǎng)基（滅菌） 避免污染環(huán)境和感染操作者 凝膠色譜 乙蛋白質(zhì) 氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫順序，降低分離效果

【解析】

凝膠色譜法是根據(jù)分子量的大小分離蛋白質(zhì)的方法之一。相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程較長(zhǎng)，移動(dòng)速度較慢；而相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動(dòng)，路程較短，移動(dòng)速度較快，先從層析柱中洗脫出來(lái)。

（1）肉湯培養(yǎng)基中含有蛋白質(zhì)，所以可以提供氮源和碳源，又含有水分和無(wú)機(jī)鹽，所以提供的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)為碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽。

（2）據(jù)圖可知，分離純化大腸桿菌的方法為平板劃線法。第一次接種操作前灼燒接種工具是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)基；劃線結(jié)束后灼燒是殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。

（3）凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法。由分析可知，乙蛋白質(zhì)先洗脫出來(lái)，所以乙的相對(duì)分子質(zhì)量較大。色譜柱內(nèi)不能有氣泡存在，一旦發(fā)現(xiàn)氣泡，必須重裝，因?yàn)闅馀輹?huì)在色譜柱內(nèi)形成無(wú)效的空隙，使本該進(jìn)入凝膠內(nèi)部的分子從這些空隙通過(guò)，攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果。