Question

3．人工瘤胃模仿了牛羊等反芻動物的胃，可用來發(fā)酵處理秸稈，提高秸稈的利用價值．為了增強發(fā)酵效果，研究人員擬從牛胃中篩選出纖維素酶高產(chǎn)菌株，并對其降解纖維素能力進行研究．請回答下列問題：
（1）在樣品稀釋和接種的步驟中，下列選項不需要的是B．
A．酒精燈    B．顯微鏡    C．培養(yǎng)皿    D．無菌水
（2）為了培養(yǎng)上述菌株，選擇的培養(yǎng)基配方是BCEFG．
A．葡萄糖    B．纖維素    C．氮源    D．纖維素酶    E．瓊脂    F．無機鹽    G．蒸餾水
（3）為確定得到的纖維素分解菌，還需要進行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實驗，纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種．
（4）純化微生物培養(yǎng)時，可采用兩種接種方法．如圖為接種后微生物培養(yǎng)的效果圖，那么獲得圖A效果的接種方法是稀釋涂布平板法，進行該操作時，滴加到培養(yǎng)基表明的菌懸液量不宜過多的原因是培養(yǎng)基表面的菌懸液會出現(xiàn)積液，導致菌體堆積，影響分離效果．圖B效果的接種方法是平板劃線法．

（5）在純化菌種時，所用的培養(yǎng)基都需要在接種前用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌．將10⁴倍的稀釋液分別涂布到4個平板上培養(yǎng)，每個平板均接種了0.1mL樣品．平板的菌落數(shù)分別是210、230、470、190，則樣品中菌種的數(shù)量為2.1×10⁷個/mL．

Answer 1

分析 1、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落．
2、統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法
（1）顯微鏡直接計數(shù)法
 ①原理：利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計數(shù)板計數(shù)； ③缺點：不能區(qū)分死菌與活菌．
（2）間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）
 ①原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌．通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌．
②操作
a、設(shè)置重復組，增強實驗的說服力與準確性．
b、為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)．
③計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)．

解答 解：（1）為了防止雜菌污染，接種步驟需要在酒精燈的火焰旁進行，A錯誤；
B、樣品稀釋和接種步驟都不需要使用顯微鏡，B正確；
C、接種步驟中需要用培養(yǎng)皿，C錯誤；
D、稀釋時需要用無菌水，D錯誤，
故選：B．
（2）分離獲得產(chǎn)纖維素酶菌需要使用選擇培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，其中必須添加瓊脂．該培養(yǎng)基應該以纖維素（秸桿）作為唯一碳源，因此不需要加葡萄糖，另外還需要加入氮源、無菌水、無機鹽、生長因子，故選：BCEFG．
（3）為確定得到的纖維素分解菌，還需要進行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實驗．
（4）純化微生物培養(yǎng)時，可采用兩種接種方法，即稀釋涂布平板法和平板劃線法．圖中A采用的稀釋涂布平板法，進行該操作時，滴加到培養(yǎng)基表明的菌懸液量不宜過多，原因是培養(yǎng)基表面的菌懸液會出現(xiàn)積液，導致菌體堆積，影響分離效果．圖B采用的平板劃線法．
（5）對培養(yǎng)基滅菌常用高壓蒸汽滅菌法．將10⁴倍的稀釋液分別涂布到4個平板上培養(yǎng)，每個平板均接種了0.1mL樣品．平板的菌落數(shù)分別是210、230、470、190，為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)，則樣品中菌種的數(shù)量為$\frac{210+230+190}{3}$×$\frac{1}{0.1}$×10⁴=2.1×10⁷個/mL．
故答案為：
（1）B
（2）BCEFG
（3）發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶
（4）稀釋涂布平板法   培養(yǎng)基表面的菌懸液會出現(xiàn)積液，導致菌體堆積，影響分離效果   平板劃線法
（5）高壓蒸汽滅菌      2.1×10⁷

點評 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識記幾種微生物常用的兩種方法；識記培養(yǎng)基的組成成分、種類及功能；識記計數(shù)微生物常用的方法及注意事項，能結(jié)合所學的知識準確答題．