Question

2007年的諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎授予在“基因靶向”技術(shù)方面作出突出貢獻(xiàn)的三位科學(xué)家�！盎�因靶向”技術(shù)，是指應(yīng)用DNA同源重組原理，通過一定的載體，用設(shè)計好的目的基因替代靶基因，從而達(dá)到使靶基因功能喪失的目的。借助這一技術(shù)，科學(xué)家用小鼠進(jìn)行實驗，使其體內(nèi)的某項特定基因喪失功能，以幫助人們找到治療疾病的有效方法。下面是該實驗的基本過程，請回答有關(guān)問題：

(1)獲得胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)：實驗一般采用ES細(xì)胞作為目的基因的受體細(xì)胞，這是因為ES細(xì)胞具有發(fā)育的______________。舉出一例獲取ES細(xì)胞的常用方法：___________________________________________________________________________________________________。

(2)獲取目的基因：

①目的基因是靶基因的同源片段，經(jīng)過修飾使靶基因的功能改變或喪失，就可獲得目的基因。

②為了提高實驗成功率，需要通過PCR技術(shù)獲得目的基因的大量拷貝。與體內(nèi)DNA復(fù)制相比，PCR反應(yīng)體系需加入哪兩種特別的物質(zhì)：_______________________________________________________________和_________________________________。

(3)構(gòu)建基因表達(dá)載體是基因工程的____________，質(zhì)粒是具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA，它所具有的一至多個____________________________位點，使目的基因插入其中成為可能，因此常被選作運載體。

(4)將基因表達(dá)載體導(dǎo)入ES細(xì)胞，從中篩選出成功發(fā)生了同源重組的ES細(xì)胞，然后培育出小鼠。

①由ES細(xì)胞培育出小鼠的過程中，需要采用哪些技術(shù)手段？____________________。

②通過檢測目的基因是否表達(dá)出蛋白質(zhì)產(chǎn)品，可以確定該小鼠體內(nèi)是否成功發(fā)生了基因的同源重組。請簡述這種檢測方法。___________________________________________。

 

Answer 1

(1)全能性　從早期胚胎(囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán))中分離(從胎兒的原始性腺中分離：通過核移植技術(shù)培育得到)

(2)兩種引物　熱穩(wěn)定DNA聚合酶

(3)核心　限制酶切割

(4)①早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)和胚胎移植技術(shù)　②提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原——抗體雜交