Question

【題目】2015年，屠呦呦因發(fā)現青蒿素治療瘧疾的新療法獲獎．工業(yè)上青蒿素一般從青蒿植株中提取，產量低，價格高．基因工程及細胞工程等為培育出高青蒿素含量的青蒿提供了思路．科學家先通過紫外線處理大量青蒿幼苗后，偶然發(fā)現一株高產植株．通過基因測序發(fā)現該高產植株控制青蒿素合成相關的一種關鍵酶的基因發(fā)生了突變．

（1）提取了高產植株的全部DNA后，要想快速大量獲得該突變基因可以采用PCR技術，該技術的原理是 ．

（2）如果用青蒿某個時期mRNA反轉錄產生的雙鏈cDNA片段，用該雙鏈cDNA進行PCR擴增，進行了30個循環(huán)后，理論上可以產生約為 個DNA分子，該雙鏈與載體連接后儲存在一個受體菌群中，這個受體菌群就叫做青蒿的 ，獲得的cDNA與青蒿細胞中該基因堿基序列 （填“相同”或“不同”）．

（3）將獲得的突變基因導入普通青蒿之前，先構建基因表達載體，圖l、2中箭頭表示相關限制酶的酶切位點．請回答：

用圖中的質粒和外源DNA構建重組質粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是 ，構建好的重組質粒在其目的基因前要加上特殊的啟動子，啟動子是 識別結合位點．

（4）檢測目的基因是否表達出相應蛋白質，應采取 技術．目的基因導入組織細胞后，通過 技術培育出青蒿幼苗．

Answer 1

【答案】（1）DNA雙鏈復制

（2）230cDNA文庫（或部分基因文庫） 不同

（3）SmaⅠ會破壞質粒的抗性基因及外源DNA中的目的基因（答對一個即得分） RNA聚合酶

（4）抗原抗體雜交 植物組織培養(yǎng)

【解析】試題分析：（1）PCR技術擴增目的基因的原理為DNA雙鏈復制．

（2）由于PCR技術利用的是DNA雙鏈復制的原理，因此用該雙鏈cDNA進行PCR擴增，進行了30個循環(huán)后，理論上可以產生約為230個DNA分子；又由于該基因庫是由青蒿某個時期mRNA反轉錄產生的雙鏈cDNA片段，因此只包含某種生物的部分基因，因此該雙鏈與載體連接后儲存在一個受體菌群中，這個受體菌群就叫做青蒿的cDNA文庫（或部分基因文庫）．通過逆轉錄得到的目的基因中缺少基因結構中的非編碼區(qū)以及編碼區(qū)的內含子，因此獲得的cDNA與青蒿細胞中該基因堿基序列不同．

（3）分析圖2可知，目的基因和抗生素抗性基因中含有SmaⅠ限制酶的切割位點，因此用SmaⅠ切割圖中的質粒和外源DNA構建重組質粒，SmaⅠ會破壞質粒的抗性基因及外源DNA中的目的基因．構建好的重組質粒在其目的基因前要加上特殊的啟動子，啟動子是RNA聚合酶識別結合位點．

（4）檢測目的基因是否表達出相應蛋白質，應采取抗原抗體雜交技術技術．目的基因導入組織細胞后，通過植物組織培養(yǎng)技術培育出青蒿幼苗．

故答案為：（1）DNA雙鏈復制

（2）230cDNA文庫（或部分基因文庫） 不同

（3）SmaⅠ會破壞質粒的抗性基因及外源DNA中的目的基因（答對一個即得分） RNA聚合酶

（4）抗原抗體雜交 植物組織培養(yǎng)