Question

【題目】淀粉樣蛋白前體（APP）是細胞膜上的跨膜蛋白，在多種腫瘤細胞中表達異常。實驗人員采用RNA干擾技術，靶向干擾鼻咽癌細胞中APP表達的方法來研究APP的生物學功能。

（1）培養(yǎng)鼻咽癌細胞。細胞培養(yǎng)時，通常在培養(yǎng)液中加入適量的___以補充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質，待細胞貼壁長成單層后用______消化處理，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。

（2）將上述鼻咽癌細胞分成三組，分別用人工脂雙層包裹的siAPP-A、siAPP-B、NC的脂質體轉染細胞。其中siAPP-A、siAPP-B是不同的靶向干擾APP表達的RNA序列，NC是無義RNA序列，由這三種RNA的功能推測它們的___________一定不同；利用脂質體轉染讓外源RNA進入癌細胞依據(jù)的是____ 。

（3）部分實驗結果如下圖：

①由圖1結果可知，細胞中β-actin蛋白的表達量相對穩(wěn)定，在實驗中可作為________，　以排除細胞培養(yǎng)操作、點樣量、檢測方法等無關變量對實驗結果的影響。實驗結　果支持靶向干擾APP表達成功，判斷依據(jù)是___________。

②分析圖2結果可知，實驗組的細胞周期比對照組，說明干擾APP的表達可以__________________ 。

（4）實驗人員進一步研究發(fā)現(xiàn)，干擾APP表達后鼻咽癌細胞的轉移能力顯著降低，作出此判斷的依據(jù)是___________。

Answer 1

【答案】動物血清 胰蛋白酶（膠原蛋白酶） 核糖核苷酸序列（堿基序列） 膜的流動性（細胞膜的流動性） 參照（標準或對照） siAPP-A、siAPP-B組APP表達量低于NC組 長抑制鼻咽癌細胞的增殖 干擾APP后鼻咽癌細胞細胞膜上糖蛋白增多，細胞黏著性增強

【解析】

動物細胞培養(yǎng)的條件:
(1)無菌、無毒的環(huán)境:(1)消毒、滅菌;(2)添加一定量的抗生素;(3)定期更換培養(yǎng)液,以清除代謝廢物。

(2)營養(yǎng)物質:糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等,還需加入血清、血漿等天然物質。

(3)溫度和PH。

(4)氣體環(huán)境:空氣(細胞代謝必需的)和5%的的作用是維持培養(yǎng)液的。

(1)動物細胞培養(yǎng)時,通常在培養(yǎng)液中加人適量的動物血清，以提供血清中細胞生活必需的一些未知成分,補充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質;由于細胞在培養(yǎng)過程中會分泌膠原蛋白等胞外蛋白,使細胞之間相互黏連,甚至細胞與培養(yǎng)瓶的內壁黏連起來,貼壁生長,待細胞貼壁長成單層后就要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理,分解細胞外的膠原蛋白,使細胞相互分離,同時使細胞從培養(yǎng)瓶壁上脫落下來，分散成單個細胞后,再分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。

(2)siAPP-A、siAPP-B和NC是不同的RNA,功能不同，因此這三種RNA中的核糖核苷酸序列(堿基序列)不同;分別用含有siAPP-A、siAPP–B、NC的脂質體(人工脂雙層)轉染癌細胞時，通過膜的流動性,讓外源RNA進人癌細胞內。

(3)①由圖甲結果可知,分別轉人siAPP-A、siAPP-B和NC的細胞中β-actin蛋白的表達量相對穩(wěn)定,在實驗中可作為標準進行對照,排除了細胞培養(yǎng)操作點樣量檢測方法等無關變量對實驗結果的影響;轉入siAPP-A和siAPP--B的實驗組中的細胞內APP表達量比轉人無義RNA作為對照的NC組少,但是不影響β-actin蛋白的表達，說明轉人的siAPP-A和siAPP-B能靶向性干擾癌細胞中APP的表達。

②由圖乙結果可知,轉人siAPP-A和siAPP-B的實驗組中的細胞比作為對照的NC組細胞數(shù)量少,說明癌細胞的增殖受到了一定程度的抑制,相同時間內細胞的分裂次數(shù)減少,細胞周期比對照組長。

(4)細胞膜表面的糖蛋白減少,癌細胞之間的黏著性下降是癌細胞容易發(fā)生擴散和轉移的重要原因。干擾APP表達后鼻咽癌細胞的轉移能力顯著降低,推測可能的原因是于擾APP表達后,鼻咽癌細胞細胞膜上糖蛋白增多,細胞黏著性增強,癌細胞不易發(fā)生擴散和轉移。