Question

【題目】大腸桿菌含有 2000 種以上的蛋白質(zhì)，是人和許多動(dòng)物腸道中最主要且數(shù)量最多的一類細(xì)菌，大腸桿菌的數(shù)量是檢測(cè)自來(lái)水是否受糞便污染的最直接的指標(biāo)。回答下列問(wèn)題：

(1)在微生物培養(yǎng)過(guò)程中，常用的滅菌方法有______。

(2)通過(guò)濾膜法（自來(lái)水過(guò)濾后的濾膜置于伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基中，再進(jìn)行計(jì)數(shù)）可以測(cè)定自來(lái)水中大腸桿菌的數(shù)目，伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基的主要成分包括：蛋白胨、NaCl、瓊脂、乳糖、伊紅和美藍(lán)水溶液，蛋白胨的作用有___________。（寫兩點(diǎn)），這種測(cè)定方法的主要原理是______，在實(shí)驗(yàn)接種前通常需要檢測(cè)固體培養(yǎng)基______ （填是否）滅菌合格。

(3)大腸桿菌在_______中合成蛋白質(zhì)，利用______分離提取到的部分大腸桿菌蛋白質(zhì)。

Answer 1

【答案】灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌 提供碳源、氮源、維生素 大腸桿菌的代謝產(chǎn)物能與伊紅-美藍(lán)反應(yīng)，使菌落呈黑色。根據(jù)培養(yǎng)基上菌落的數(shù)目，計(jì)算出大腸桿菌的數(shù)量 是 核糖體 凝膠色譜法

【解析】

1、培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。根據(jù)化學(xué)成分分為合成培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基等根據(jù)用途分選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基；大腸桿菌的代謝產(chǎn)物能與伊紅—美藍(lán)發(fā)生特定的顏色反應(yīng)，使菌落呈黑色，該培養(yǎng)基是伊紅—美藍(lán)培養(yǎng)基，因此屬于鑒別培養(yǎng)基。蛋白胨是將肉、酪素或明膠用酸或蛋白酶水解后干燥而成，富含有機(jī)氮化合物，也含有一些維生素和糖類，因此添加在培養(yǎng)基中主要作為氮源、也可以提供碳源和維生素。

2、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法：（1）顯微鏡直接計(jì)數(shù)法：①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)； ③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。

（2）間接計(jì)數(shù)法（活菌計(jì)數(shù)法）：①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。

3、凝膠色譜法的原理是：小分子蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程較長(zhǎng)、移動(dòng)速度較慢，后被洗脫出來(lái)；而分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程較短，移動(dòng)速度較快，先被洗脫出來(lái)。所用的洗脫液是磷酸緩沖液。

（1）在微生物培養(yǎng)過(guò)程中，常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。

（2）蛋白胨含多種有機(jī)物，能提供碳源、氮源、維生素等；通過(guò)伊紅-美藍(lán)染色法可計(jì)算培養(yǎng)基上菌落的數(shù)目，計(jì)算出大腸桿菌的數(shù)量；固體培養(yǎng)基配制完成后，需在接種前將空白培養(yǎng)基即未接種的培養(yǎng)基放在適宜的條件下放置一段時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落出現(xiàn)，檢測(cè)是否滅菌合格。

（3）大腸桿菌屬于原核生物，細(xì)胞器只有核糖體，因此在核糖體上合成蛋白質(zhì)，根據(jù)以上分析可知，可以利用凝膠色譜法分離提取到的部分大腸桿菌蛋白質(zhì)。