Question

【題目】下圖為三種質(zhì)粒和一個(gè)含目的基因的 DNA 片段，其中 Ap 為氨芐青霉素抗性基因，Tc 為四環(huán)素抗性基因，lacZ 為藍(lán)色顯色基因，EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）等為限制酶及其切割位點(diǎn)與復(fù)制原點(diǎn)之間的距離。已知1 kb＝1000個(gè)堿基對的長度。請回答下列問題：

（1）片段 D 為目的基因中的某一片段，則限制酶和 DNA 連接酶的作用部位依次是_______________ 、______________（填圖中數(shù)字標(biāo)號））

（2）圖中能作為目的基因運(yùn)載體最理想的質(zhì)粒是__________（填A(yù)/B/C））據(jù)圖分析，其他兩種質(zhì)粒一般不能作為運(yùn)載體的理由分別是______________、_________。

（3）如果將目的基因和質(zhì)粒 A 構(gòu)建重組質(zhì)粒,然后再用 EcoRⅠ酶切這個(gè)重組質(zhì)粒，進(jìn)行電泳觀察，可出現(xiàn)長度分別為 1.1 kb 和_________________kb 的兩個(gè)片段，或者長度分別為___________kb 、_________kb的兩個(gè)片段。

Answer 1

【答案】② ② B 質(zhì)粒A缺少標(biāo)記基因 質(zhì)粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時(shí)，復(fù)制原點(diǎn)會(huì)被破壞 5.4 3.1 kb 3.4kb

【解析】

分析題圖：如圖所示為三種質(zhì)粒和一個(gè)含目的基因的DNA片段示意圖．圖中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因，lacZ為藍(lán)色顯色基因。EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）等為限制酶及其切割的位點(diǎn)與復(fù)制原點(diǎn)的距離。片段D中，①是氫鍵，②是磷酸二酯鍵。

（1）DNA聚合酶和DNA連接酶的作用部位均為磷酸二酯鍵，即圖中部位②。

（2）圖中質(zhì)粒A缺少標(biāo)記基因；質(zhì)粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時(shí)，復(fù)制原點(diǎn)會(huì)被限制酶切割，會(huì)影響重組質(zhì)粒的自主復(fù)制．因此，能作為目的基因運(yùn)載體最理想的質(zhì)粒是B。

（3）目的基因和質(zhì)粒A形成的重組質(zhì)粒總長度為4.0+2.5=6.5kb（質(zhì)粒+切割出來的目的基因）、其中重組質(zhì)粒含有兩個(gè)EcoRⅠ酶切位點(diǎn)，一個(gè)在插入的目的基因中，一個(gè)在原質(zhì)粒中。若用EcoRⅠ酶切該重組質(zhì)粒必然會(huì)產(chǎn)生2個(gè)片段，若產(chǎn)生的其中一個(gè)片段長度為1.1Kb，則說明另一個(gè)片段6.5-1.1=5.4kb；若目的基因與質(zhì)粒A的連接位置與前一種剛好相反，重組質(zhì)粒的總長度不變，但經(jīng)EcoRⅠ酶切后產(chǎn)生的兩個(gè)片段長度不同，分別為（1.3-1.2）+（4.0-1.0）=3.1Kb、6.5-3.1=3.4Kb。