Question

逆轉(zhuǎn)錄病毒載體是一種表達(dá)型質(zhì)粒，結(jié)構(gòu)如圖所示．如圖的“逆轉(zhuǎn)錄病毒序列”可以整合到動物細(xì)胞的染色體上，不斷地表達(dá)其攜帶的目的基因，獲得大量重組逆轉(zhuǎn)錄病毒．（E、F、H分別為限制酶 E、F、H的酶切位點(diǎn)）．
（1）逆轉(zhuǎn)錄的模板是

 

，原料是

 

．
（2）在構(gòu)建重組質(zhì)粒時，目的基因插入該質(zhì)粒，此過程需要的酶是限制酶

 

和

 

（3）將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)人大腸桿菌前用某種離子處理大腸桿菌使之成為

 

才能完成轉(zhuǎn)化過程．為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加

 

的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)．
（4）獲取大量重組質(zhì)粒后，可培育轉(zhuǎn)基因小鼠，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入小鼠受精卵的方法是

 

．若目的基因進(jìn)人細(xì)胞后插入在一條染色體DNA上，那么獲得轉(zhuǎn)基因純合子小鼠的方法是

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：分析題圖：圖示為一種表達(dá)型質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)示意圖，該質(zhì)粒含有E、F、H三種限制酶的酶切位點(diǎn)；含有抗生素A抗性基因，可作為標(biāo)記基因；含有“逆轉(zhuǎn)錄病毒序列”，該序列可以整合到動物細(xì)胞的染色體上，不斷地表達(dá)其攜帶的目的基因，獲得大量重組逆轉(zhuǎn)錄病毒．

解答： 解：（1）逆轉(zhuǎn)錄是以RNA為模板合成DNA的過程，需要以四種脫氧核苷酸為原料．
（2）根據(jù)題干信息“逆轉(zhuǎn)錄病毒序列可以整合到動物細(xì)胞的染色體上，不斷地表達(dá)其攜帶的目的基因”可知，在構(gòu)建重組質(zhì)粒時，應(yīng)將目的基因插入該質(zhì)粒的逆轉(zhuǎn)錄病毒序列中，因此該過程應(yīng)選用限制酶F切割質(zhì)粒和含有目的基因的外源DNA分子，此外還需要DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組DNA分子．
（3）將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞時，需用Ca²⁺（或CaCl₂）處理微生物細(xì)胞使之成為感受態(tài)細(xì)胞（易吸收周圍環(huán)境中的DNA分子）才能完成轉(zhuǎn)化過程．標(biāo)記基因是抗生素A抗性基因，因此可用含有抗生素A的培養(yǎng)基篩選含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌．
（4）顯微注射法將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法．若目的基因進(jìn)人細(xì)胞后插入在一條染色體DNA上，則轉(zhuǎn)基因動物可被看成雜合子，要想獲得轉(zhuǎn)基因純合子小鼠，可讓轉(zhuǎn)基因小鼠間相互交配（或雜交）．
故答案為：
（1）RNA   （四種）脫氧核苷酸
（2）F    DNA連接酶
（3）感受態(tài)細(xì)胞   抗生素A   
（4）顯微注射法   轉(zhuǎn)基因小鼠間相互交配（或雜交）

點(diǎn)評：本題結(jié)合質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖，考查基因工程、基因分離定律的實(shí)質(zhì)及應(yīng)用，要求考生識記基因工程的工具及操作步驟，能根據(jù)題干信息和圖示信息選擇合適的限制酶；掌握基因分離定律的實(shí)質(zhì)，明確轉(zhuǎn)基因生物可被視為雜合子，再根據(jù)題干要求答題．