Question

【題目】多聚半乳糖醛酸酶（PG）能降解果膠使細胞壁破損，成熟的番茄果實中，PG合成顯著增加，能使果實變紅變軟，但不利于保鮮。利用基因工程減少PG基因的表達，可延長果實保質期�？茖W家將PG基因反向接到Ti質粒上，導入番茄細胞中，得到轉基因番茄，具體操作流程如圖。據圖回答下列問題：

（1）提取目的基因①若已獲取PG的mRNA，可通過_______獲取PG基因。②在該基因上游加結構A可確�；�因的反向轉錄，結構A上應具有 結合位點。③重組質粒轉移到大腸桿菌中的目的是______。

（2）用含目的基因的農桿菌感染番茄原生質體后，可用含有______的培養(yǎng)基進行篩選，培養(yǎng)24~48h后取樣，在質量分數(shù)為25%的蔗糖溶液中，觀察細胞________現(xiàn)象來鑒別細胞壁是否再生。

（3）由于導入的目的基因能轉錄出反義RNA，且能與_________互補結合，因此可抑制PG基因的正常表達。若轉基因番茄的保質期比非轉基因番茄________，則可確定轉基因番茄培育成功。

（4）獲得的轉基因番茄產生的種子不一定保留目的基因，科研人員常采用 方法使子代保持轉基因番茄的優(yōu)良性狀。

Answer 1

【答案】

（1）①反轉錄 ②RNA聚合酶 ③使目的基因隨質粒的復制而增加

（2）卡那霉素 是否發(fā)生質壁分離

（3）天然PG基因轉錄的mRNA 長

（4）無性繁殖（或植物組織培養(yǎng)）

【解析】（1）已獲取PG的mRNA，可通過逆轉錄（反轉錄）的方法獲得目的基因。因轉錄的產物是mRNA，在轉錄時需要RNA聚合酶。重組質粒轉化到大腸桿菌中的目的是大量復制目的基因。

（2）由圖可知重組質粒中含卡那霉素抗性基因而四環(huán)素抗性基因被破壞，故可用含卡那霉素的培養(yǎng)基進行篩選。植物細胞在質量分數(shù)為25%的蔗糖溶液中會發(fā)生質壁分離現(xiàn)象，所以可以用來鑒別細胞壁是否再生。

（3）由以上分析可知，反義RNA與天然PG基因轉錄的mRNA結合，從而抑制翻譯過程．若轉基因番茄的保質期比非轉基因番茄長，則可確定轉基因番茄成功。

（4）獲得的轉基因番茄產生的種子不一定保留目的基因，植物組織培養(yǎng)屬于無性繁殖，故科研人員常采用植物組織培養(yǎng)方法使子代保持轉基因的優(yōu)良性狀。