Question

【題目】Graves�。�GD）可導(dǎo)致甲狀腺功能亢進(jìn)。研究發(fā)現(xiàn)，GD患者甲狀腺細(xì)胞表面表達(dá)大量細(xì)胞間粘附分子1（ICAM-1），導(dǎo)致甲狀腺腫大�？蒲腥藛T通過制備單克隆抗體，對(duì)治療GD進(jìn)行了嘗試。

（1）用ICAM-1作為抗原間隔多次免疫若干只小鼠，幾周后取這些免疫小鼠的血清，分別加入多孔培養(yǎng)板的不同孔中，多孔培養(yǎng)板中需加入________以檢測(cè)這些小鼠產(chǎn)生的抗體。依據(jù)反應(yīng)結(jié)果，選出抗原-抗體反應(yīng)最________（強(qiáng)/弱）的培養(yǎng)孔所對(duì)應(yīng)的小鼠M。

（2）取小鼠M的脾臟細(xì)胞制備成細(xì)胞懸液，與實(shí)驗(yàn)用骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，用選擇培養(yǎng)基篩選得到具有________能力的細(xì)胞。核苷酸合成有兩個(gè)途徑，物質(zhì)A可以阻斷其中的全合成途徑（如下圖）。正常細(xì)胞內(nèi)含有補(bǔ)救合成途徑所必需的轉(zhuǎn)化酶和激酶，制備單克隆抗體時(shí)選用的骨髓瘤細(xì)胞中缺乏轉(zhuǎn)化酶。可用加入H、A、T三種物質(zhì)的“HAT培養(yǎng)基”篩選特定的雜交瘤細(xì)胞。

融合前將部分培養(yǎng)細(xì)胞置于含HAT的選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一段時(shí)間后培養(yǎng)基中________（有/無）骨髓瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，說明培養(yǎng)基符合實(shí)驗(yàn)要求。雜交瘤細(xì)胞可以在HAT培養(yǎng)基上大量繁殖的原因是________________。

（3）將獲得的上述細(xì)胞在多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，用ICAM-1檢測(cè)，從中選擇________的雜交瘤細(xì)胞，植入小鼠腹腔中克隆培養(yǎng)，一段時(shí)間后從小鼠腹水中提取實(shí)驗(yàn)用抗體。

（4）若進(jìn)一步比較實(shí)驗(yàn)用抗體和131I對(duì)GD模型小鼠的治療作用，可將若干GD模型小鼠等分為三組，請(qǐng)補(bǔ)充下表中的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。

對(duì)照組（A）	131I治療組（B）	單克隆抗體治療組（C）
給GD模型小鼠腹腔注射0．1mL無菌生理鹽水	給GD模型小鼠腹腔注射溶于0．1mL無菌生理鹽水的131I	________

Answer 1

【答案】ICAM-1 強(qiáng) 無限增殖 無 雜交瘤細(xì)胞可以進(jìn)行補(bǔ)救合成途徑 大量產(chǎn)生抗ICAM-1抗體 給GD模型小鼠腹腔注射溶于0.1mL無菌生理鹽水的抗ICAM-1單克隆抗體

【解析】

1、單克隆抗體：由單個(gè)B淋巴細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖形成的細(xì)胞系所產(chǎn)生出的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。具有特異性強(qiáng)、靈敏度高，并能大量制備的特點(diǎn)。

2、單克隆抗體的制備過程：首先用特定抗原注射小鼠體內(nèi)，使其發(fā)生免疫，小鼠體內(nèi)產(chǎn)生具有免疫能力的B淋巴細(xì)胞，利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)將免疫的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合。單克隆抗體制備過程中的兩次篩選：第一次篩選，利用特定選擇培養(yǎng)基篩選，獲得雜交瘤細(xì)胞，即AB型細(xì)胞（A為B淋巴細(xì)胞，B為骨髓瘤細(xì)胞），不需要A、B、AA、BB型細(xì)胞；第二次篩選，利用多孔板法和抗原-抗體雜交法篩選，獲得產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。

（1）抗原和抗體結(jié)合具有特異性，多孔培養(yǎng)板中需加入ICAM-1以檢測(cè)小鼠是否產(chǎn)生抗ICAM-1的抗體。依據(jù)反應(yīng)結(jié)果，選出陽性（或“抗原-抗體”）反應(yīng)最強(qiáng)的培養(yǎng)孔所對(duì)應(yīng)的小鼠M。

（2）B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后具備了骨髓瘤細(xì)胞無限增殖的特點(diǎn)。制備單克隆抗體時(shí)選用的骨髓瘤細(xì)胞中缺乏轉(zhuǎn)化酶，無法進(jìn)行補(bǔ)救合成途徑，且物質(zhì)A阻斷了全合成途徑，故在HAT培養(yǎng)基中無骨髓瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。雜交瘤細(xì)胞含有補(bǔ)救合成途徑所必需的轉(zhuǎn)化酶和激酶，可以進(jìn)行補(bǔ)救合成途徑，可以在HAT培養(yǎng)基上大量繁殖。

（3）根據(jù)抗原和抗體結(jié)合的特異性，用ICAM-1檢測(cè)，從中選擇大量產(chǎn)生抗ICAM-1抗體的雜交瘤細(xì)胞，植入小鼠腹腔中克隆培養(yǎng)，一段時(shí)間后從小鼠腹水中提取實(shí)驗(yàn)用抗體。

（4）根據(jù)題干中實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹氨容^實(shí)驗(yàn)用抗體和131I對(duì)GD模型小鼠的治療作用”，依據(jù)實(shí)驗(yàn)的單一變量原則，單克隆抗體治療組（C）中應(yīng)給GD模型小鼠腹腔注射溶于0.1mL無菌生理鹽水的抗ICAM-1單克隆抗體。