Question

下表中列出幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點。請回答下列問題。

（1）一個圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)SmaⅠ切割前后，分別含有　　　　個游離的磷酸基團。

（2）若對圖中質(zhì)粒進行改造，插入SmaⅠ酶切位點越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越　　　。用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用SmaⅠ，原因是　　　　　　　　　　。

（3）與使用EcoRⅠ相比較，使用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時處理質(zhì)粒、外源DNA的優(yōu)點在于可以防止　　　　　　　。

（4）為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并加入　　　酶。重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了　　　　　　　。

（5）為了從cDNA文庫中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在　　　　　　　　　的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達的初步檢測。

 

Answer 1

【答案】

（7分）

（1）0，2�。�2）高　SmaⅠ會破壞質(zhì)粒的抗性基因，外源DNA中的目的基因　

（3）質(zhì)粒和合目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化

（4）DNA連接　鑒定和篩選合目的基因的細胞　

（5）蔗糖為唯一含碳營養(yǎng)物質(zhì)

【解析】本題考查基因工程的相關(guān)知識。限制性內(nèi)切酶具有特異性，能識別特定的堿基序列并在特定的位點切割DNA分子。:(1)切割前質(zhì)粒為環(huán)狀,不含游離的磷酸基團。切割后質(zhì)粒成了一個鏈狀的雙鏈DNA分子,含兩個游離的磷酸基團。

(2)因為SmaⅠ識別序列中均為G—C堿基對,G、C之間含三個氫鍵,熱穩(wěn)定性高。

(3)據(jù)圖可知,SmaⅠ既會破壞標記基因,也會破壞目的基因。

(4)若用同種限制酶切割質(zhì)粒和外源DNA中的目的基因,因為兩端的黏性末端相同,會出現(xiàn)自身環(huán)化的情況。而用兩種限制酶切割,因為兩端形成的黏性末端不同,不會出現(xiàn)自身環(huán)化。

(5)DNA連接酶可以連接具有相同黏性末端的DNA片段。

(6)標記基因可以鑒別受體細胞是否含有目的基因。目的基因是蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因，將其導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體后，應(yīng)進行目的基因的檢測與鑒定，可根據(jù)受體細胞是否含有蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白，即是否具備吸收蔗糖的能力判斷基因工程是否成功。因而可在含有蔗糖唯一碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。