Question

【題目】現代生物科技中篩選是一個重要過程。請回答下列技術有關篩選問題：

（1）過程③是雜交瘤細胞的培養(yǎng)，在體外培養(yǎng)時培養(yǎng)基中需要提供一定濃度的CO2，目的是_______。雜交瘤細胞需要經過兩次篩選，第一次篩選的目的是_________。

（2）過程②誘導融合運用的原理是_______，該過程中區(qū)別于植物原聲質體融合的方法是用________

處理。植物原生質體融合后，需從_______種兩兩融合的細胞中篩選出雜種細胞的原聲質體。

（3）研究人員采用PCR技術獲取酶D基因和轉運肽基因，該技術是利用________ 的原理，使相應基因呈指數增加。所含三種限制酶（XbaⅠ、ClaⅠ、SacⅠ）的切點如圖所示，則用______和________處理兩個基因后，可得到酶D基因和轉運肽基因的重組基因，選用這兩種酶的原因是_________。

Answer 1

【答案】維持培養(yǎng)液的pH 獲得雜交瘤細胞 細胞膜的流動性 滅活的病毒 3 DNA雙鏈復制 ClaⅠ DNA連接酶 需要重組的兩個基因都具有ClaⅠ切割位點，兩個基因重組需要DNA連接酶鏈接

【解析】

1.單克隆抗體的制備是將骨髓瘤細胞與漿細胞結合，經過選擇培養(yǎng)基的篩選得到雜交瘤細胞并經專一抗體檢測后，培養(yǎng)能產生特定抗體的雜交瘤細胞即可得單克隆抗體，涉及動物細胞培養(yǎng)和動物細胞融合技術；雜交瘤細胞集合了兩個細胞的遺傳物質，但不一定全部表達；單克隆抗體最廣泛的用途是用作體外診斷試劑，具有準確、快速等優(yōu)點。

2.基因文庫包括cDNA文庫、基因組文庫等．某個群體包含一種生物所有的基因的文庫叫基因組文庫，而用某種生物發(fā)育的某個時期的mRNA反轉錄產生的多種互補DNA片段屬于cDNA文庫。

3.限制酶能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性．同種限制酶切割能夠產生相同的黏性末端，便于質粒和目的基因連接。

（1）動物細胞培養(yǎng)時需要加入一定量的二氧化碳，其作用是維持培養(yǎng)液的pH值。雜交瘤細胞需要經過兩次篩選，第一次篩選的目的是利用選擇培養(yǎng)基將融合后的雜交瘤細胞選擇出來。

（2）圖中過程②誘導動物融合運用的原理是細胞膜的流動性，誘導動物細胞融合采用的方法包括：物理法、化學法和生物法，其不同于植物原生質體融合的方法是利用滅活的病毒介導動物細胞融合。植物原生質體融合后，如果考慮兩兩融合有三種情況，即同種細胞原生質體融合和雜種細胞原生質體間的融合，經過選擇培養(yǎng)從中選擇出雜種原生質體。

（3）PCR技術采用體外DNA雙鏈復制的原理，使相應基因呈指數增加。分析轉運肽基因和酶D基因的限制酶切點可知，兩個片段同時具有ClaⅠ限制酶切割位點，這樣可以用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個基因后，得到相連的重組基因。