Question

5．回答下列有關(guān)生物技術(shù)與基因表達(dá)的問題
如圖1所示為利用現(xiàn)代生物技術(shù)獲得能表達(dá)某蛋白酶工程菌的過程及工程菌表達(dá)目的基因的模式圖．
選用的質(zhì)粒A上有 I、II、III、IV四種限制酶切割位點(diǎn)．

（1）據(jù)圖推斷過程①獲取目的基因時(shí)，應(yīng)選用的限制酶是II和 III．過程②是利用DNA連接酶酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組質(zhì)粒．過程③為重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞，如受體細(xì)胞為小鼠受精卵，則選用的常規(guī)方法是顯微注射．
（2）如同時(shí)用酶I和酶IV切割圖中質(zhì)粒A，產(chǎn)生1.8kb和8.2kb的兩種片段（1kb=1000對(duì)堿基對(duì)），如用四種酶同時(shí)切割質(zhì)粒A，則產(chǎn)生0.6kb和8.2kb兩種片段，那么用同時(shí)用酶II和酶IV切割質(zhì)粒A，則產(chǎn)生的片段有1.2kb和8.8kb．
（3）獲得此蛋白酶后，利用酶的固定化技術(shù)能回收和重復(fù)利用此蛋白酶，如圖2所示屬于固定化技術(shù)中的載體結(jié)合法的是B．

Answer 1

分析 分析圖1：①表示獲取目的基因，②表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，③表示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，④表示目的基因隨著大腸桿菌的增殖而擴(kuò)增．
分析圖2：A、D是包埋法，B是吸附法，C是化學(xué)結(jié)合法．

解答 解：（1）含有目的基因的外源DNA分子中含有三種限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，若采用限制酶Ⅰ切割會(huì)破壞目的基因，因此過程①獲取目的基因時(shí)，應(yīng)選用的限制酶是II和 III．過程②中將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組質(zhì)粒需要DNA連接酶．過程③中將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法．
（2）如同時(shí)用酶I和酶IV切割圖中質(zhì)粒A，產(chǎn)生1.8kb和8.2kb的兩種片段（1kb=1000對(duì)堿基對(duì)），如用四種酶同時(shí)切割質(zhì)粒A，則產(chǎn)生0.6kb和8.2kb兩種片段，則限制酶1和Ⅱ、限制酶Ⅱ和Ⅲ、限制酶Ⅲ和Ⅳ之間的長度都是0.6kb，因此同時(shí)用酶II和酶IV切割質(zhì)粒A，則產(chǎn)生的片段有0.6+0.6=1.2kb和8.2+0.6=8.8kb．
（3）圖中A、D是包埋法，B是吸附法，C是化學(xué)結(jié)合法．化學(xué)法包括結(jié)合法、交聯(lián)法，吸附法和共價(jià)鍵法又可統(tǒng)稱為載體結(jié)合法．因此，圖2所示屬于固定化技術(shù)中的載體結(jié)合法的是B．
故答案為：
（1）II和 III   DNA連接酶    顯微注射   
（2）1.2kb和8.8kb
（3）B

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．