Question

【題目】回答與基因工程和植物克隆有關(guān)的問題：

（1）影響重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體菌的因素有：受體菌細(xì)胞壁的通透性、受體菌的生長狀態(tài)、培養(yǎng)條件以及________________（答出2點(diǎn)即可）。經(jīng)轉(zhuǎn)化、培養(yǎng)后，目的基因能和質(zhì)粒一起在___________大量擴(kuò)增。

（2）聚一B羥基丁酯是某些細(xì)菌的儲能物質(zhì)，把來源于產(chǎn)堿桿菌的合成聚一B羥基丁酯（可用于生產(chǎn)可降解的生物塑料）有關(guān)基因轉(zhuǎn)入到擬南芥后，在擬南芥可大量生產(chǎn)出聚一B羥基丁酯；在此過程中需用___________________酶建立起產(chǎn)堿桿菌的______________，從而獲得所需的目的基因；若為工業(yè)化生產(chǎn)則將擬南芥培養(yǎng)至____________，從中提取聚一B羥基丁酯。

（3）利用植物的克隆技術(shù)大量繁殖名貴花卉時，需將組織塊放在____________上進(jìn)行培養(yǎng)獲得創(chuàng)傷組織，以適當(dāng)配比的___________________________________誘導(dǎo)創(chuàng)傷組織，直到再生新植株。

Answer 1

【答案】重組質(zhì)粒的的濃度和重組質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)、受體細(xì)胞的密度和生長狀態(tài)等 宿主細(xì)胞（受體細(xì)胞）內(nèi) DNA限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶 基因文庫 愈傷組織（創(chuàng)傷組織） 半固體培養(yǎng)基 營養(yǎng)物質(zhì)和生長調(diào)節(jié)劑

【解析】

基因工程一般要經(jīng)歷四個步驟：提取目的基因、目的基因與運(yùn)載體結(jié)合、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、目的基因的檢測與鑒定。（1）獲得目的基因的方法：①從基因文庫中獲��；②利用PCR技術(shù)擴(kuò)增；③人工合成（化學(xué)合成）。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞受多種因素的影響，主要從兩方面考慮，一是受體菌方面，包括受體菌的生長狀態(tài)、受體菌細(xì)胞壁的通透性、受體細(xì)胞的密度和生長狀態(tài)、培養(yǎng)條件等；二是重組質(zhì)粒方面，包括重組質(zhì)粒的的濃度和重組質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)等。重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞后，目的基因能和質(zhì)粒一起在宿主細(xì)胞增殖。

（2）基因工程用到的酶工具包括DNA限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶，在這兩種酶的作用下，建立產(chǎn)堿桿菌的基因文庫，為獲取目的基因做準(zhǔn)備；進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)，可將擬南芥培養(yǎng)成愈傷組織，以便大規(guī)模提取聚一B羥基丁酯。

（3）植物組織培養(yǎng)的過程：配置半固體培養(yǎng)基——獲取外植體——脫分化形成愈傷組織——再分化形成胚狀體——試管苗——移栽。在誘導(dǎo)愈傷組織形成過程中通常加入適當(dāng)比例的營養(yǎng)物質(zhì)和植物生長調(diào)節(jié)劑。一般情況下：生長素/細(xì)胞分裂素比值高，有利于根分化，抑制芽的形成；比值低，有利于芽分化，抑制根形成；比例適中，有利于愈傷組織生長。