Question

苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質，自然界中存在著能降解苯酚的微生物．某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，①為土壤樣品，請回答下列問題：

（1）②中培養(yǎng)菌株的選擇培養(yǎng)基中應加入

 

作為碳源，②中不同濃度碳源的培養(yǎng)基

 

（A．影響；B．不影響）細菌的數(shù)量，如果要測定②中活細菌數(shù)量，常采用

 

法．
（2）④為對照、微生物在④中不生長、在⑤中生長，④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于

 

；使用

 

法可以在⑥上獲得單菌落．采用固體平板培養(yǎng)細菌時進行倒置培養(yǎng)是為了防止

 

．
（3）用同樣苯酚濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)不同菌株，一定時間后，測定

 

來比較不同菌株降解苯酚能力的大�。�
（4）實驗過程中對

 

、

 

、

 

 進行無菌操作．

Answer 1

考點：微生物的分離和培養(yǎng)

專題：

分析：（1）本題考查細菌的分離技術．題目中所篩選的細菌“只能”降解苯酚，故可采用以苯酚為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基篩選，含除苯酚外其他碳源的培養(yǎng)基作為對照．培養(yǎng)液中苯酚濃度下降的速度可反映該菌對苯酚的降解能力，嚴格滅菌、無菌操作可有效防止實驗過程中的雜菌污染．
（2）測定微生物數(shù)量的方法：
①直接計數(shù)法：常用顯微鏡直接技術法，一般適用于純培養(yǎng)懸浮液中各種單細胞菌體的計數(shù)．
②間接計數(shù)法：常用稀釋平板計數(shù)法，平板培養(yǎng)基上長出一個菌落就代表原待測樣品中一個微生物個體．

解答： 解：（1）選擇分解苯酚的菌的培養(yǎng)基是以苯酚為唯一碳源的培養(yǎng)基；苯酚是唯一的碳源，當苯酚消耗盡時，菌株因缺少碳源而不能繼續(xù)繁殖，所以②中不同濃度的碳源A影響細菌數(shù)量；一般采用稀釋涂布平板法來測定②中活菌數(shù)目．
（2）④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于④的培養(yǎng)基沒有加入苯酚作為碳源，⑤培養(yǎng)基的中加入苯酚作為碳源；使用釋涂布平板法或平板劃線法可以在⑥上獲得單菌落．采用固體平板培養(yǎng)細菌時要倒置培養(yǎng)，以防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基．
（3）取多支潔凈培養(yǎng)瓶→分別加入相同培養(yǎng)基加等量的苯酚→分別接種多種等量的來自不同菌株的菌種→在相同的適宜條件下培養(yǎng)相同時間→再檢測這多支瓶內培養(yǎng)基的苯酚的含量或PH值的大小，從而比較不同菌株降解苯酚能力的大�。�
（4）從制備培養(yǎng)基到接種與培養(yǎng)等全部實驗過程要無菌操作：無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法．獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是防止外來雜菌的入侵：
a．實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和和消毒；
b．將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌；
c．為避免周圍環(huán)境中微生物污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行；
d．實驗操作時應避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸．
故答案為：
（1）苯酚　A　平板菌落計數(shù)（活菌計數(shù)或菌落計數(shù)）
（2）④的培養(yǎng)基沒有加入苯酚作為碳源   稀釋涂布平板法或平板劃線法   　培養(yǎng)過程產(chǎn)生的水分影響微生物的生長
（3）一定時間后，測定培養(yǎng)液中苯酚含量或PH值的大小
（4）培養(yǎng)基滅菌    接種環(huán)境滅菌   接種過程無菌操作

點評：本題綜合微生物的培養(yǎng)及實驗設計和分析能力，意在考查考生能理解所學知識的要點，把握知識間的內在聯(lián)系的能力；能運用所學知識與觀點，對某些生物學問題進行解釋、推理，做出合理的判斷或得出正確的結論的能力；對實驗現(xiàn)象和結果進行解釋、分析、處理的能力．