Question

【題目】納豆和腐乳都是豆類發(fā)酵品，用納豆桿菌發(fā)酵大豆制作納豆的流程原理與腐乳的制作相似。納豆桿菌能分泌納豆激酶等�；卮鹣铝袉栴}

（1）納豆制作的原理是___________________________。

（2）納豆激酶能夠水解血栓中水不溶性的纖維蛋白，所以具有溶解血栓的作用。納豆桿菌的篩選和分離常用到由磷酸鹽緩沖液、纖維蛋白和瓊脂配制而成的乳白色的纖維蛋白培養(yǎng)基。從培養(yǎng)基營養(yǎng)組成的角度來看，其中的纖維蛋白的作用是__________________________。

若培養(yǎng)基上出現(xiàn)_________________________，說明含有納豆桿菌。

（3）提純納豆激酶可用于制備藥物。為提取純化納豆激酶，可進(jìn)行下列實(shí)驗(yàn)：

①接種具有高纖溶活性的菌落到液體發(fā)酵培養(yǎng)基。37℃，搖床振蕩，發(fā)酵3天。

②收集發(fā)酵液，離心，分層，取_____________作為提取納豆激酶的材料。

③透析法分離：將上述離心所得樣品裝人透析袋，置于25mmo/L磷酸鹽緩沖液中透析，以便達(dá)到__________________________的目的。

④凝膠色譜純化：將透析液進(jìn)行柱層析，用____________進(jìn)行洗脫，試管連續(xù)收集。

⑤為了確認(rèn)試管收集液中是否含有納豆激酶，還要__________________________。

Answer 1

【答案】納豆桿菌等微生物分泌的蛋白酶能將豆類中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸 充當(dāng)碳源和氮源，提供能源物質(zhì) （較大）溶解圈 上清液 去除/置換樣品中分子量較小的雜質(zhì) （25mmol/L）磷酸（鹽）緩沖液 添加適量收集液到纖維蛋白培養(yǎng)基上（或添加適量收集液到含有血栓的溶液里）

【解析】

1、腐乳的制作原理：以豆腐為原料利用毛霉等微生物分泌出各種酶，促使豆腐坯中的蛋白質(zhì)分解成營養(yǎng)價(jià)值高的氨基酸和一些風(fēng)味物質(zhì)。有些氨基酸本身就有一定的鮮味，腐乳在發(fā)酵過程中也促使豆腐坯中的淀粉轉(zhuǎn)化成酒精和有機(jī)酸，同時(shí)還有輔料中的酒及香料也參與作用，共同生成了帶有香味的酯類及其他一些風(fēng)味成分，從而構(gòu)成了腐乳所特有的風(fēng)味。腐乳在制作過程中發(fā)酵，蛋白酶和附著在菌皮上的細(xì)菌慢慢地滲入到豆腐坯的內(nèi)部，逐漸將蛋白質(zhì)分解，大約經(jīng)過三個(gè)月至半年的時(shí)間，松酥細(xì)膩的腐乳就做好了，滋味也變得質(zhì)地細(xì)膩、鮮美適口。

2、培養(yǎng)基的成分包括：碳源、氮源、無機(jī)鹽和水，有的需要生長因子等。碳源分為無機(jī)碳源和有機(jī)碳源，無機(jī)碳源如二氧化碳，有機(jī)碳源如葡萄糖，碳源是構(gòu)成生物體細(xì)胞的物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物，有些是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)；氮源分為無機(jī)氮源（銨鹽、硝酸鹽等）和有機(jī)氮源（尿素、牛肉膏等），合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物。

3、血紅蛋白的提取和分離：（1）樣品處理：洗滌，用生理鹽水洗滌，低速離心，直至上清液中沒有黃色；（2）血紅蛋白釋放：加入蒸餾水和甲苯，細(xì)胞破碎釋放血紅蛋白；（3）分離：低速離心，分成4層，第三層紅色透明液體為血紅蛋白水溶液層，分出該層；（4）透析：放入透析袋，出去分子量較小的雜質(zhì)；（5）過凝膠色譜柱收集純蛋白。

（1）根據(jù)題意可知，用納豆桿菌發(fā)酵大豆制作納豆的流程原理與腐乳的制作相似，因此納豆制作的原理是：利用納豆桿菌等微生物分泌的蛋白酶能將豆類中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸。

（2）根據(jù)培養(yǎng)基的成分可知，纖維蛋白既含有碳元素也含有氮元素，因此可以作為碳源和氮源使用，提供能源物質(zhì)，由于納豆桿菌能分泌納豆激酶，納豆激酶能夠水解水不溶性的纖維蛋白，在乳白色的固體培養(yǎng)基上如果存在納豆桿菌，則可以在培養(yǎng)基上形成較大的溶解圈。

（3）納豆激酶的化學(xué)本質(zhì)屬于蛋白質(zhì)，因此提純納豆激酶的方法即提純蛋白質(zhì)的方法。實(shí)驗(yàn)步驟：

①接種具有高纖溶活性的菌落到液體發(fā)酵培養(yǎng)基。37℃，搖床振蕩，發(fā)酵3天。

②收集發(fā)酵液，離心，分層，取上清液作為提取納豆激酶的材料。

③透析法分離：將上述離心所得樣品裝人透析袋，置于25mmo/L磷酸鹽緩沖液中透析，透析的目的是去除/置換樣品中分子量較小的雜質(zhì)。

④凝膠色譜純化：將透析液進(jìn)行柱層析，用25mmo/L磷酸鹽緩沖液進(jìn)行洗脫，試管連續(xù)收集。

⑤為了確認(rèn)試管收集液中是否含有納豆激酶，還要添加適量收集液到纖維蛋白培養(yǎng)基上，觀察是否出現(xiàn)溶解圈。