Question

【題目】人組織纖溶酶原激活物(htPA)是一種糖蛋白，具有很高的藥用價(jià)值，可以通過生物工程大量生產(chǎn)。下圖為含htPA基因的表達(dá)載體。請回答下列相關(guān)問題：

(1)限制酶主要是從________中獲得，其特點(diǎn)是能夠識別DNA分子的_________，并在特定位點(diǎn)切割DNA。質(zhì)粒DNA分子上有一個(gè)至多個(gè)限制酶切位點(diǎn)，其作用是______。

(2)構(gòu)建基因組文庫是獲取目的基因的常用方法，與基因組文庫相比，cDNA文庫的基因數(shù)相對要少，原因是________。

(3)作為受體細(xì)胞的酵母茵缺失URA3基因，必須在含有尿嘧啶的培養(yǎng)基中才能存活，因此，圖示表達(dá)載體上的URA3基因可作為____，供鑒定和選擇；為了篩選出成功導(dǎo)入表達(dá)載體的酵母菌，所使用的培養(yǎng)基____（填“需要”“不需要”）添加尿嘧啶。

(4)若要在羊乳中獲得htPA，為了獲得轉(zhuǎn)基因母羊，移植前需對已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行________。若在轉(zhuǎn)htPA基因羊的羊乳中檢測到____，說明目的基因成功表達(dá)。

Answer 1

【答案】原核生物（或微生物） 特定的（脫氧）核苷酸序列 供外源DNA片段（基因）插入 cDNA文庫只能收集到生物發(fā)育到某時(shí)期已發(fā)生轉(zhuǎn)錄的基因，（而基因組文庫能收集到全部基因） 標(biāo)記基因 不需要 性別鑒定 htPA（或人組織纖溶酶原激活物）

【解析】

1、DNA重組技術(shù)至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運(yùn)載體。2、目的基因分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。

3、該基因工程需要對羊的性別進(jìn)行選擇，由于只有母羊能夠分泌乳汁，因此選擇母羊的胚胎進(jìn)行移植。

（1）限制酶主要是從原核生物（或原核細(xì)胞）中分離純化出來的。每一種限制性酶可以識別特定的（脫氧）核苷酸序列。質(zhì)粒DNA分子可用作載體，其上有一個(gè)至多個(gè)限制酶切位點(diǎn)，其作用是供外源DNA片段（基因）插入。

（2）cDNA文庫只能收集到生物發(fā)育到某時(shí)期已發(fā)生轉(zhuǎn)錄的基因，（而基因組文庫能收集到全部基因）故與基因組文庫相比，cDNA文庫的基因數(shù)相對要少。

（3）圖示表達(dá)載體上的URA3基因可作為標(biāo)記基因，供鑒定和選擇；由于缺失URA3基因的酵母菌必須在含有尿嘧啶的培養(yǎng)基中才能存活，重組質(zhì)粒中含有URA3基因，為了篩選出成功導(dǎo)入表達(dá)載體的酵母菌，即所使用的培養(yǎng)基不需要添加尿嘧啶，如果能存活，說明導(dǎo)入成功；如不能存活，說明沒有成功。

（4）只有母羊能分泌乳汁，為了獲得母羊，移植前需對已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行性別鑒定；若在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中檢測到htPA（或人組織纖溶酶原激活物），說明目的基因成功表達(dá)。