Question

5．如圖是利用現(xiàn)代生物工程技術培育轉基因抗病香蕉的過程圖解，請據圖回答：

（1）PstⅠ的識別序列為-G^↓ACGTC-．如果用此酶切割DNA，則形成的能“粘連”起來兩段DNA片段為
．
（2）構建重組Ti質粒時，需要PstI酶和EcoRI酶參與．將重組Ti質粒轉入農桿菌時，可以用CaCl₂處理農桿菌，使重組Ti質粒易于導入．
（3）培養(yǎng)基中的青霉素會抑制香蕉愈傷組織細胞的生長．若利用該培養(yǎng)基篩選己導入抗病基因的香蕉細胞，應使重組Ti質粒中含有抗青霉素基因，重組質粒中抗生素抗性基因可作為標記基因，原因是它能鑒別受體細胞中是否含有目的基因．
（4）由導入目的基因的細胞培養(yǎng)成轉基因抗病香蕉，采用的是植物組織培養(yǎng)技術．將培育的轉基因抗病香蕉進行無性繁殖，在產生的后代中檢測各單株的抗病性，結果發(fā)現(xiàn)有少數(shù)植株表現(xiàn)為不抗病，造成這一結果最可能的原因是抗病基因沒有表達．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）PstⅠ的識別序列為-G^↓ACGTC-，則其切割DNA后形成的能“粘連”起來兩段DNA片段為．
（2）含有目的基因的外源DNA分子上有三種限制酶的識別序列，但SmaⅠ酶的識別序列位于目的基因上，用該酶切割會破壞目的基因，因此構建基因表達載體時，應該選用PstI 酶和EcoRI 酶．將目的基因導入微生物細胞常用感受態(tài)轉化法，即用CaCl₂處理微生物細胞，使其成為易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細胞．
（3）培養(yǎng)基中的青霉素會抑制香蕉愈傷組織細胞的生長．若利用該培養(yǎng)基篩選己導入抗病基因的香蕉細胞，應使重組Ti質粒中含有抗青霉素基因；重組質粒中抗生素抗性基因能鑒別受體細胞中是否含有目的基因，因此可作為標記基因．
（4）將轉基因植物細胞培育成轉基因植株需要采用植物組織培養(yǎng)技術；將培育的轉基因抗病香蕉進行無性繁殖，在產生的后代中檢測各單株的抗病性，結果發(fā)現(xiàn)有少數(shù)植株表現(xiàn)為不抗病，造成這一結果最可能的原因是抗病基因沒有表達．
故答案為：
（1）如圖

（2）PstI      EcoRI         CaCl₂
（3）抗青霉素基因      它能鑒別受體細胞中是否含有目的基因
（4）植物組織培養(yǎng)      抗病基因沒有表達

點評 本題結合圖解，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的概念、原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能結合圖中信息和題中信息準確答題．