Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題；

（一）回答與香蕉酒制作有關的問題；

（1）香蕉果肉含糖高，又有一定的酸度，適于作為果酒發(fā)酵的原料。但香蕉果漿的黏度大，需向香蕉果漿中添加果膠酶使果膠最終分解為__________________，使果漿中的固體與液體分離效果更好；然后進行沸水浴處理，原因是__________________，然后對產物進行__________________，可見果汁的出汁率與澄清度大大提高。

（2）將獲得的果汁置于90℃環(huán)境中__________________處理15分鐘，以減少其他雜菌干擾。取出果汁后冷卻，再經過糖酸調配、硫處理后，最后向果汁中添加__________________進行果酒發(fā)酵。

（3）發(fā)酵后第15天，當發(fā)酵瓶中__________________，即表示發(fā)酵完畢，可取10mL香蕉酒離心獲得__________________，利用__________________法測定香蕉酒的澄清度。

（二）回答與基因工程和單克隆抗體制備有關的問題：

（1）單克隆抗體在病毒的鑒定上具有重要的作用。首先將特定抗原物多次對小鼠進行腹腔注射，取小鼠的骨髓瘤細胞和脾細胞按一定比例混合，并加入一定量的PEG或__________________作介導進行融合。

（2）將融合好的細胞接種在__________________上，并置于CO2培養(yǎng)箱內培養(yǎng)。經過一定時間后，將培養(yǎng)液中的雜交細胞通過__________________篩選出陽性雜交瘤細胞，為獲得單一細胞群體和純凈均一的單克隆抗體，往往對陽性雜交瘤細胞進行__________________。

（3）單克隆抗體還可通過單個B細胞抗體技術獲得。首先將分選到的單個B細胞進行裂解，獲得特異性抗體的基因片段，利用__________________法對其進行擴增，隨后構建重組質粒，并導入至細菌中大量復制，為了提高重組質粒導入細菌的效率，需要考慮__________________（至少答出兩點）等因素。

（4）從細菌中提取擴增后的重組質粒，導入至小鼠成纖維細胞內表達抗體，37℃培養(yǎng)一段時間后，將培養(yǎng)液離心獲取抗體，并進一步__________________、檢測便可獲得單克隆抗體。

Answer 1

【答案】半乳糖醛酸 沸水浴使纖維素等固形物凝聚 過濾 滅菌（殺菌） 酵母菌 停止出現氣泡 上清液 比濁/光電比色/比色 仙臺病毒 飼養(yǎng)層/滋養(yǎng)細胞 抗體檢驗 細胞克隆/克隆培養(yǎng)法 PCR 導入方法、篩選條件、防止污染、重組DNA的質量和濃度、試劑的質量（氯化鈣的純度）、受體細胞的生長狀態(tài)和密度 純化

【解析】

1、果膠酶不是特指一種酶，而是分解果膠的一類酶的總稱，包括多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶和果膠酯酶。

2、參與果酒制作的微生物是酵母菌，其新陳代謝類型為異養(yǎng)兼性厭氧型。果酒制作的原理：

（1）在有氧條件下，1分子C6H12O6和6分子H2O和6分子O2在酶的作用下生成6分子CO2和12分子H2O，并放出大量的能量；

（2）在無氧條件下，1分子C6H12O6在酶的作用下生成2分子CO2和2分子C2H5OH，并放出少量的能量。

3、基因工程的操作步驟為：

第一步：目的基因的獲�。�

（1）目的基因是指：編碼蛋白質的結構基因；

（2）原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成，人工合成目的基因的常用方法有反轉錄法和化學合成法；

（3）PCR技術擴增目的基因。

第二步：基因表達載體的構建：

（1）目的：使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用；

（2）組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因。

第三步：將目的基因導入受體細胞：

（1）轉化的概念：是目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程；

（2）常用的轉化方法：

①將目的基因導入植物細胞：采用最多的方法是農桿菌轉化法，其次還有基因槍法和花粉管通道法等；

②將目的基因導入動物細胞：最常用的方法是顯微注射技術，此方法的受體細胞多是受精卵；

③將目的基因導入微生物細胞：Ca2+轉化法。

（3）重組細胞導入受體細胞后，篩選含有基因表達載體受體細胞的依據是標記基因是否表達。

第四步：目的基因的檢測和表達：

（1）首先要檢測轉基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子雜交技術；

（2）其次還要檢測目的基因是否轉錄出mRNA，方法是用標記的目的基因作探針與mRNA雜交；

（3）最后檢測目的基因是否翻譯成蛋白質，方法是從轉基因生物中提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原--抗體雜交；

（4）有時還需進行個體生物學水平的鑒定．如轉基因抗蟲植物是否出現抗蟲性狀。

4、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應，之后從小鼠脾臟中獲取已經免疫的B淋巴細胞；誘導B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；進行抗體檢測，篩選出能產生特定抗體的雜交瘤細胞；進行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

（一）（1）香蕉果肉含糖高，又有一定的酸度，適于作為果酒發(fā)酵的原料。但香蕉果漿的黏度大，需向香蕉果漿中添加果膠酶使果膠最終分解為半乳糖醛酸，使果漿中的固體與液體分離效果更好；然后進行沸水浴處理，原因是沸水浴使纖維素等固形物凝聚，然后對產物進行過濾，可見果汁的出汁率與澄清度大大提高。

（2）將獲得的果汁置于90℃環(huán)境中滅菌處理15分鐘，以減少其他雜菌干擾。取出果汁后冷卻，再經過糖酸調配、硫處理后，最后向果汁中添加酵母菌進行果酒發(fā)酵。

（3）發(fā)酵后第15天，當發(fā)酵瓶中停止出現氣泡，即表示發(fā)酵完畢，可取10mL香蕉酒離心獲得上清液，利用比濁（或光電比色或比色）法測定香蕉酒的澄清度。

（二）（1）單克隆抗體在病毒的鑒定上具有重要的作用。首先將特定抗原物多次對小鼠進行腹腔注射，取小鼠的骨髓瘤細胞和脾細胞按一定比例混合，并加入一定量的PEG或滅活病毒作介導進行融合。

（2）將融合好的細胞接種在飼養(yǎng)層或滋養(yǎng)細胞上，并置于CO2培養(yǎng)箱內培養(yǎng)。經過一定時間后，將培養(yǎng)液中的雜交細胞通過抗體檢驗篩選出陽性雜交瘤細胞，為獲得單一細胞群體和純凈均一的單克隆抗體，往往對陽性雜交瘤細胞進行細胞克�。ɑ蚩寺∨囵B(yǎng)法）。

（3）單克隆抗體還可通過單個B細胞抗體技術獲得。首先將分選到的單個B細胞進行裂解，獲得特異性抗體的基因片段，利用PCR法對其進行擴增，隨后構建重組質粒，并導入至細菌中大量復制，為了提高重組質粒導入細菌的效率，需要考慮導入方法、篩選條件、防止污染、重組DNA的質量和濃度、試劑的質量（氯化鈣的純度）、受體細胞的生長狀態(tài)和密度等因素。

（4）從細菌中提取擴增后的重組質粒，導入至小鼠成纖維細胞內表達抗體，37℃培養(yǎng)一段時間后，將培養(yǎng)液離心獲取抗體，并進一步純化、檢測便可獲得單克隆抗體。