Question

【題目】回答下列關(guān)于基因工程的相關(guān)問題：

(l)基因工程中限制酶的作用是____。用兩種不同的限制酶分別切割目的基因的兩端獲得目的基因，與經(jīng)過同樣雙酶切的運載體連接構(gòu)建基因表達載體。與單一酶切相比，雙酶切具有的優(yōu)點是____（答出兩點）。

(2)基因表達載體應(yīng)該包括啟動子、目的基因、標記基因和____。常把兩個啟動子串聯(lián)在一起形成雙啟動子，加在目的基因上游，雙啟動子的作用可能是____。標記基因的作用是______________。

(3)目的基因可以在受體細胞中表達的原因是____。若要檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄，可采用的分子水平的檢測方法是____。

Answer 1

【答案】識別特定的核苷酸序列，在特定的位點切割DNA分子 防止目的基因（載體）自身連接 防止目的基因與運載體反向連接 終止子 保證目的基因的高效轉(zhuǎn)錄（高效表達） 鑒別受體細胞中是否含有目的基因 目的基因與受體細胞共用一套遺傳密碼 分子雜交

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

1、目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。

2、基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

3、將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。

4、目的基因的檢測與鑒定：

（1）分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。

（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）限制酶的作用是識別特定的核苷酸序列，在特定的位點切割DNA分子；在構(gòu)建基因表達載體時，為了防止目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化、目的基因與質(zhì)粒反向連接，需要用兩種不同的限制分別切割目的基因的兩端和質(zhì)粒，使目的基因和質(zhì)粒獲得不同的黏性末端。

（2）基因表達載體包括：啟動子、終止子、目的基因、標記基因等；經(jīng)兩個啟動子串聯(lián)在一起的目的是保證目的基因的高效轉(zhuǎn)錄；標記基因的作用是鑒別受體細胞中是否含有目的基因。

（3）所有生物都共用一套遺傳密碼，所以目的基因可以在受體細胞中表達；目的基因是否轉(zhuǎn)錄可采用的分子水平的檢測方法是分子雜交技術(shù)。