Question

19．我國首例綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬在東北農(nóng)業(yè)大學的種豬場自然分娩產(chǎn)出，這標志著我國在轉(zhuǎn)基因克隆豬技術(shù)領(lǐng)域已達到世界領(lǐng)先水平．如圖為我國首例綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程示意圖，請據(jù)圖回答：

（1）該過程使用質(zhì)粒的目的是作為運載體，與目的基因形成基因表達載體，將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細胞內(nèi)，并進行自我復制．
（2）圖中通過過程①②形成重組質(zhì)粒，需要限制酶切取目的基因、切割質(zhì)粒．限制酶Ⅰ的識別序列和切點是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是-↓GATC-．在質(zhì)粒上有酶Ⅰ的一個切點，在目的基因的兩側(cè)各有1個酶Ⅱ的切點．在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接起來可以，理由是：因為形成的黏性末端是相同的（或是可以互補的）．
（3）圖示工程中，將重組質(zhì)粒導入豬胎兒成纖維細胞常用的方法是顯微注射技術(shù)．然后還要通過DNA分子雜交技術(shù)來檢測綠色熒光蛋白基因是否已重組到豬胎兒成纖維細胞的染色體DNA上．
（4）圖示中，將所采集到的卵母細胞在體外培養(yǎng)到減數(shù)分裂第二次分裂中期（M II中期）期即可通過顯微操作將其細胞核去除并形成重組細胞，用物理或化學方法進行激活，然后再通過動物細胞培養(yǎng)（早期胚胎培養(yǎng)）技術(shù)培養(yǎng)成早期胚胎．
（5）過程⑧的實質(zhì)是早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)移．

Answer 1

分析 據(jù)圖分析，①表示獲取綠色熒光蛋白基因，②表示基因表達載體的構(gòu)建，③表示將目的基因?qū)�入受體細胞，④表示取供體細胞的細胞核，⑤去除卵母細胞的細胞核，⑥表示核移植，⑦表示早期胚胎的培養(yǎng)，⑧表示胚胎移植．

解答 解：（1）基因工程中，利用質(zhì)粒作為運載體，與目的基因形成基因表達載體，將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細胞內(nèi)，并進行自我復制．
（2）酶Ⅰ和酶Ⅱ識別序列不同，但切割后產(chǎn)生的黏性末端的末端序列相同，因此在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端可以連接．
（3）將重組質(zhì)粒導入動物細胞時，采用最多也最有效的方法是顯微注射法．然后還要通過DNA分子雜交技術(shù)來檢測綠色熒光蛋白基因是否已重組到豬胎兒成纖維細胞的染色體DNA上．
（4）圖示中，將所采集到的卵母細胞在體外培養(yǎng)到減數(shù)分裂第二次分裂中期（M II中期）期即可通過顯微操作將其細胞核去除并形成重組細胞，用物理或化學方法進行激活，然后再通過動物細胞培養(yǎng)（早期胚胎培養(yǎng)）技術(shù)培養(yǎng)成早期胚胎．
（5）過程⑧表示胚胎移植，該技術(shù)的實質(zhì)是早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)移．
故答案為：
（1）作為運載體，與目的基因形成基因表達載體，將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細胞內(nèi)，并進行自我復制
（2）可以　因為形成的黏性末端是相同的（或是可以互補的）
（3）顯微注射技術(shù)    DNA分子雜交
（4）減數(shù)分裂第二次分裂中期（M II中期）      動物細胞培養(yǎng)（早期胚胎培養(yǎng)）
（5）早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)移

點評 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理、工具及操作步驟，能準確判斷圖中各過程的含義，再結(jié)合圖中信息準確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．