Question

12．血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是目前發(fā)現(xiàn)的誘導腫瘤血管生成的最強烈的血鋅生成因子，針對VEGF生產(chǎn)的抗腫瘤藥物，是治療癌癥的一個方向；芝加哥大學的Katherine Knight博士成功地在轉(zhuǎn)基因兔中獲得骨髄瘤樣腫瘤，經(jīng)技術改進，能高產(chǎn)量地生產(chǎn)兔單克隆抗體：我國江蘇省某公司首次在全球成功開發(fā)出人源化兔單抗藥物“注射用人源化抗VEGF單克隆抗體”（SIM63），有效打破了跨國公司的技術壟斷．人源化抗體可以大大減少異源抗體對人類機體造成的免疫副反應．請回答下列相關問題：
（1）動物細胞在體外培養(yǎng)的技術屬于動物細胞工程，由于人們對動物細胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)沒有完全搞淸楚，在使用合成培養(yǎng)基時，通常需要加入血清（或血漿）等一些天然成分：在培養(yǎng)時除提供細胞所需的O₂外，還需要CO2，其作用是維持培養(yǎng)液的PH．
（2）在基因工程中，將目的基因?qū)�入動物細胞現(xiàn)今極常用、極有效的方法是顯微注射，要在短時間內(nèi)擴增大量的目的基因采用PCR（多聚酶鏈式反應）技術，這個技術中的關鍵酶是Taq酶（熱穩(wěn)定DNA聚合酶）．
（3）當VEGF作為抗原進入動物體內(nèi)時，動物體內(nèi)的某些B細胞分化為漿細胞，這種漿細胞只分泌針對VEGF的一種抗體，但B細胞在體外培養(yǎng)不會無限增殖，解決這一問題的方法是通過動物細胞融合技術得到雜交瘤細胞，常用的化學誘導融合試劑為聚乙二醇（PEG），要分離出雜交瘤細胞，應該用選擇培養(yǎng)基進行篩選，單克隆抗體最主要的優(yōu)點是它的特異性強、靈敏度高，并可大量制備．

Answer 1

分析 1、動物細胞培養(yǎng)條件：
（1）無菌、無毒的環(huán)境：①消毒、滅菌②添加一定量的抗生素③定期更換培養(yǎng)液，以清楚代謝廢物
（2）營養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)．
（3）溫度和PH：
（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細胞代謝必需的）和5%的CO₂，CO₂主要作用是維持培養(yǎng)液的pH．
2、PCR技術擴增目的基因：
（1）原理：DNA雙鏈復制
（2）過程：第一步：加熱至90～95℃DNA解鏈；第二步：冷卻到55～60℃，引物結合到互補DNA鏈；第三步：加熱至70～75℃，熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補鏈的合成．

解答 解：（1）動物細胞在體外培養(yǎng)的技術屬于動物細胞工程，由于人們對動物細胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)沒有完全搞淸楚，在使用合成培養(yǎng)基時，通常需要加入血清（或血漿）等一些天然成分，在培養(yǎng)時除提供細胞所需的O₂外，還需要CO2，其作用是維持培養(yǎng)液的PH．
（2）在基因工程中，將目的基因?qū)�入動物細胞最常用的方法是顯微注射，要在短時間內(nèi)擴增大量的目的基因采用PCR技術，這個技術需要利用Taq酶（熱穩(wěn)定DNA聚合酶）．
（3）通過動物細胞融合技術得到雜交瘤細胞，常用的化學誘導融合試劑為聚乙二醇（PEG），要分離出雜交瘤細胞，應該用選擇培養(yǎng)基進行篩選，單克隆抗體最主要的優(yōu)點是它的特異性強、靈敏度高，并可大量制備．
故答案為：
（1）動物細胞     血清（或血漿）  維持培養(yǎng)液的PH
（2）顯微注射   PCR（多聚酶鏈式反應）     Taq酶（熱穩(wěn)定DNA聚合酶）
（3）聚乙二醇（PEG）   選擇   　特異性強、靈敏度高

點評 本題考查了基因工程、細胞工程的有關知識，要求考生能夠識記PCR技術的過程和條件，識記動物細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)條件，掌握單克隆抗體制備的過程等有關知識，屬于考綱中識記、理解層次的考查．