Question

4．綠色熒光蛋白基因（GFP）表達(dá)的產(chǎn)物能在特殊的條件下發(fā)出綠色熒光，在基因工程中可起到標(biāo)記基因的作用，請(qǐng)回答：
（1）欲通過基因工程將大豆與賴氨酸含量較高有關(guān)的基因（記做H）導(dǎo)入玉米的體細(xì)胞中，并用GFP做標(biāo)記基因培育賴氨酸含量較高的玉米時(shí)，可將綠色熒光蛋白基因與H基因連接到一起再和其它組分一起構(gòu)建基因表達(dá)載體，然后導(dǎo)入玉米的體細(xì)胞，常用的導(dǎo)入方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（2）科學(xué)家設(shè)想將（GFP）與控制某特異性抗體合成的基因一起導(dǎo)入能無限增殖的癌細(xì)胞中，通過培養(yǎng)這些細(xì)胞可從細(xì)胞產(chǎn)物中獲得特異性抗體，在此過程中要對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)液中的物質(zhì)進(jìn)行專一抗體檢測，才能最后確定哪些細(xì)胞能產(chǎn)生所需抗體；但在實(shí)際生產(chǎn)中往往還需要進(jìn)行最終個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定，即從培養(yǎng)液中提取產(chǎn)物，看是否含有特異性抗體，能最后確定基因工程是否成功．
（3）如欲獲得心臟細(xì)胞能發(fā)出綠色熒光的豬，應(yīng)設(shè)法將綠色熒光蛋白基因?qū)�入豬的受精卵細(xì)胞中，常用的方法是顯微注射法；然后通過細(xì)胞培養(yǎng)、胚胎移植等技術(shù)可獲得轉(zhuǎn)基因豬，為使GFP只在豬的心臟細(xì)胞中表達(dá)，應(yīng)將GFP接到心臟細(xì)胞蛋白基因的啟動(dòng)子后面．
（4）獲得轉(zhuǎn)基因克隆豬時(shí)，需利用技術(shù)除（3）所述外還應(yīng)有核移植技術(shù)，此過程需要準(zhǔn)備的受體細(xì)胞是處于減數(shù)第二次分裂中期時(shí)期的次級(jí)卵母細(xì)胞．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）欲通過基因工程將大豆與賴氨酸含量較高有關(guān)的基因（記做H）導(dǎo)入玉米的體細(xì)胞中，并用GFP做標(biāo)記基因培育賴氨酸含量較高的玉米時(shí)，可將綠色熒光蛋白基因與目的基因（H基因）連接到一起再和其它組分一起構(gòu)建基因表達(dá)載體，然后導(dǎo)入玉米的體細(xì)胞；將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（2）控制某特異性抗體合成的基因的表達(dá)產(chǎn)物是特異性抗體；在實(shí)際生產(chǎn)中往往還需要進(jìn)行最終個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定，即從培養(yǎng)液中提取產(chǎn)物，看是否含有特異性抗體，能最后確定基因工程是否成功．
（3）如欲獲得心臟細(xì)胞能發(fā)出綠色熒光的豬，應(yīng)設(shè)法將綠色熒光蛋白基因?qū)�入豬的受精卵細(xì)胞中，常用顯微注射法；然后通過細(xì)胞培養(yǎng)、胚胎移植等技術(shù)可獲得轉(zhuǎn)基因豬，為使GFP只在豬的心臟細(xì)胞中表達(dá)，應(yīng)將GFP接到心臟細(xì)胞蛋白基因的啟動(dòng)子后面．
（4）克隆動(dòng)物還需要采用核移植技術(shù)，此過程需要準(zhǔn)備的受體細(xì)胞是處于減數(shù)第二次分裂中期的次級(jí)卵母細(xì)胞．
故答案為：
（1）H基因    基因表達(dá)載體     農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法
（2）特異性抗體    從培養(yǎng)液中提取產(chǎn)物，看是否含有特異性抗體
（3）受精卵     顯微注射法    動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、胚胎移植等     啟動(dòng)子
（4）核移植技術(shù)     減數(shù)第二次分裂中期

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟的相關(guān)細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．