Question

【題目】紫杉醇是目前最好的抗腫瘤藥物之一，但其藥源植物紅豆杉十分稀缺。大多數(shù)紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)物的紫杉醇產(chǎn)量較低，研究人員通過(guò)構(gòu)建紫杉醇合成關(guān)鍵酶(Bapt)基因的超表達(dá)載體來(lái)提高紫杉醇產(chǎn)量，其流程如下。

(1)過(guò)程①②使用的工具酶分別是_________和_________。

(2)p1303載體上有一種叫增強(qiáng)子的元件，結(jié)合題意推測(cè)增強(qiáng)子的作用是_________。除了與目的基因表達(dá)有關(guān)的功能元件之外，p1303載體上還應(yīng)有_________標(biāo)記基因和_________。

(3)能否通過(guò)Bapt基因探針來(lái)檢測(cè)步驟⑤是否成功?為什么? _________。

(4)為檢驗(yàn)最終的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖欠襁_(dá)到，還應(yīng)檢測(cè)_________。

Answer 1

【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶 Taq酶 促進(jìn)Bapt基因的表達(dá) 潮霉素 復(fù)制原點(diǎn) 不能，因?yàn)榧t豆杉細(xì)胞中本身存在Bapt基因，不管超表達(dá)載體是否成功導(dǎo)入，都能與Bapt基困探針形成雜交分子 紫杉醇的產(chǎn)量

【解析】

據(jù)圖①逆轉(zhuǎn)錄構(gòu)建紅豆杉的cDNA文庫(kù)；②PCR技術(shù)擴(kuò)增Bzpt基因；③表達(dá)載體的構(gòu)建④將表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞；⑤用含有表達(dá)載體的農(nóng)桿菌感染受體紅豆杉細(xì)胞。

（1）①為逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化；②為PCR擴(kuò)增過(guò)程，該過(guò)程需要使用Taq酶。

（2）根據(jù)題干信息“研究人員通過(guò)構(gòu)建紫杉醇合成關(guān)鍵酶（Bapt）基因的超表達(dá)載體來(lái)提高紫杉醇產(chǎn)量”可知，p1303載體上增強(qiáng)子的作用是促進(jìn)Bapt基因的表達(dá)�；�因表達(dá)載體的組成包括啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因、目的基因、復(fù)制原點(diǎn)等，由圖可知，標(biāo)記基因是潮霉素抗性基因，因此除了與目的基因表達(dá)有關(guān)的功能元件（啟動(dòng)子和終止子）之外，p1303載體上還應(yīng)有標(biāo)記基因（潮霉素抗性基因）和復(fù)制原點(diǎn)。

（3）因?yàn)榧t豆杉細(xì)胞中本身存在Bapt基因，不管超表達(dá)載體是否成功導(dǎo)入，都能與Bapt基因探針形成雜交分子，因此不能通過(guò)Bapt基因探針來(lái)檢測(cè)步驟⑤是否成功。

（4）根據(jù)題干信息“研究人員通過(guò)構(gòu)建紫杉醇合成關(guān)鍵酶（Bapt）基因的超表達(dá)載體來(lái)提高紫杉醇產(chǎn)量”可知，為檢驗(yàn)最終的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖欠襁_(dá)到，還應(yīng)檢測(cè)紫杉醇的產(chǎn)量。