Question

【題目】紅細(xì)胞含有大量的血紅蛋白，紅細(xì)胞的機(jī)能主要是由血紅蛋白完成的，血紅蛋白的主要功能是攜帶O2或CO2，我們可以選用豬、牛、羊或其他脊椎動(dòng)物的血液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，來(lái)提取和分離血紅蛋白，請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題：

（1）血紅蛋白提取和分離的過(guò)程可分為四步：________、________、________和________。

（2）實(shí)驗(yàn)前取新鮮的血液，要切記在采血容器中預(yù)先加入檸檬酸鈉，取血回來(lái)，馬上進(jìn)行離心，收集、血紅蛋白溶液。

①加入檸檬酸鈉的目的是________________。

②以上所述的過(guò)程即是樣品處理，它包括________、________收集血紅蛋白溶液。

（3）洗滌紅細(xì)胞的目的是________________________。

（4）你如何知道紅細(xì)胞已洗滌干凈？_______________________________________。

（5）分離紅細(xì)胞時(shí)的離心速度及離心時(shí)間分別是_______________________________________。

（6）若離心速度過(guò)高和時(shí)間過(guò)長(zhǎng)結(jié)果會(huì)怎樣？_______________________________________。

（7）將收集的血紅蛋白溶液放在透析袋中進(jìn)行透析，即樣品的粗分離。

①透析的目的是______________________。

②透析的原理是______________________。

（8）然后通過(guò)凝膠色譜法將樣品進(jìn)一步純化，最后經(jīng)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定。樣品純化的目的是_______________________________________。

Answer 1

【答案】 樣品處理 粗分離 純化 純度鑒定 防止血液凝固 紅細(xì)胞的洗滌 血紅蛋白的釋放 去除血漿蛋白 離心后的上清液沒(méi)有黃色 低速500 r/min短時(shí)間如2 min 離心速度過(guò)高和時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)使白細(xì)胞等一同沉淀，得不到純凈的紅細(xì)胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度 去除分子量較小的雜質(zhì) 透析袋能使小分子自由進(jìn)出，而大分子則保留在袋內(nèi) 通過(guò)凝膠色譜法將相對(duì)分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白除去

【解析】主要考查蛋白質(zhì)分離與鑒定的基本原理及實(shí)驗(yàn)流程。

（1）分離、提取血紅蛋白的實(shí)驗(yàn)流程大致是樣品處理→粗分離→純化→純度鑒定四個(gè)步驟。（2）①檸檬酸鈉是一種抗凝劑，加入檸檬酸鈉可以防止血液凝固。②樣品處理包括紅細(xì)胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、收集血紅蛋白溶液。

（3）洗滌紅細(xì)胞的目的是去除血漿蛋白，以利于后續(xù)步驟的分離純化。

（4）離心后的上清液沒(méi)有黃色，表明紅細(xì)胞已洗滌干凈。

（5）分離紅細(xì)胞應(yīng)采用低速短時(shí)間離心，如500 r/min離心2 min。

（6）若離心速度過(guò)高和時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)使白細(xì)胞等一同沉淀，得不到純凈的紅細(xì)胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。

（7）①透析的目的是：去除分子量較小的雜質(zhì)。②透析的原理是：透析袋一般是用硝酸纖維素制成的，透析袋能使小分子自由進(jìn)出，而將大分子保留在袋內(nèi)。

（8）凝膠色譜法是一種根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法。相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)只能從凝膠間隙通過(guò)，路程短，移動(dòng)速度快，先到達(dá)色譜柱的下端；相對(duì)分子質(zhì)量小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程較長(zhǎng)，移動(dòng)速度較慢�？梢�(jiàn)，通過(guò)凝膠色譜法去除相對(duì)分子質(zhì)量較大的雜質(zhì)蛋白。