Question

【題目】真核生物基因中通常有內(nèi)含子，而原核生物基因中沒(méi)有。原核生物沒(méi)有真核生物所具有的切除內(nèi)含子對(duì)應(yīng)的RNA序列的機(jī)制。有人利用RT—PCR技術(shù)(mRNA逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA再進(jìn)行PCR擴(kuò)增），獲得了牛基因G，導(dǎo)人到大腸桿菌中，成功表達(dá)出G蛋白。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）RT-PCR過(guò)程需要的酶有___________。進(jìn)行PCR擴(kuò)增的前提是_______，以便能夠設(shè)計(jì)出需要的________種引物序列。

（2）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，RT—PCR的產(chǎn)物和PBV載體都要經(jīng)過(guò)BamH I和 EcoRI兩種酶切后再連接，目的是_________(答出兩點(diǎn)）。

（3）若要檢測(cè)基因G是否翻譯出蛋白G，可采用的檢測(cè)方法是___________。有人從牛的基因組文庫(kù)中獲得了基因G，同樣以大腸桿菌作為受體細(xì)胞卻未得到蛋白G，其原因是________。

Answer 1

【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶（熱穩(wěn)定DNA聚合酶） 要有一段已知目的基因的核苷酸序列 2 防止目的基因（載體）自身連接，防止目的基因與運(yùn)載體反向連接 抗原一抗體雜交 從基因組文庫(kù)獲取的G基因有內(nèi)含子，在大腸桿菌中，其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中與內(nèi)含子對(duì)應(yīng)的RNA序列不能被切除，無(wú)法表達(dá)出蛋白G

【解析】

1、真核生物的基因編碼區(qū)是不連續(xù)的，含有內(nèi)含子和外顯子，內(nèi)含子和外顯子都會(huì)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生相應(yīng)的RNA，但內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄來(lái)的RNA被切除產(chǎn)生的RNA為mRNA，之后翻譯產(chǎn)生相應(yīng)的蛋白質(zhì)。原核生物的基因編碼區(qū)是連續(xù)的，不含有內(nèi)含子和外顯子，編碼區(qū)直接轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生相應(yīng)的RNA，之后翻譯產(chǎn)生相應(yīng)的蛋白質(zhì)。

2、基因工程的基本步驟：目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定。

（1）根據(jù)題意可知，RTPCR技術(shù)是mRNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA再進(jìn)行PCR擴(kuò)增的過(guò)程，其中逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化，而PCR技術(shù)需要Taq酶（熱穩(wěn)定的DNA聚合酶）的催化。進(jìn)行PCR擴(kuò)增的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便能夠設(shè)計(jì)出需要的2種引物序列。

（2）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，與單一酶切相比，雙酶切可以防止目的基因（載體）自身連接，也可以防止目的基因與運(yùn)載體反向連接。

（3）若要檢測(cè)基因G是否翻譯出蛋白G，可采用抗原抗體雜交；有人從牛的基因組文庫(kù)中獲得了基因G，同樣以大腸桿菌作為受體細(xì)胞卻未得到蛋白G，是因?yàn)閺幕�因組文庫(kù)獲取的G基因有內(nèi)含子，在大腸桿菌中，其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中與內(nèi)含子對(duì)應(yīng)的RNA序列不能被切除，因此無(wú)法表達(dá)出蛋白G。