Question

【題目】干擾素是一種淋巴因子，可用于治療病毒感染和癌癥�？茖W家利用大腸桿菌生產人體干擾素的操作過程如下，請回答：

（1）大腸桿菌常被作為基因工程的受體細胞，因其具有_______特點。在人體淋巴細胞中獲得干擾素mRNA后，經_______過程獲得干擾素cDNA。如果用人體發(fā)育某個時期的mRNA獲得多種cDNA片段，與載體連接后儲存在一個受體菌群中，這個受體菌群體叫做_______。

（2）請舉出在生物體外重復②③④過程進行DNA克隆和體內DNA復制的兩點不同之處_______ 、_______。

（3）在利用甲、乙獲得丙的過程中，常用兩種限制酶同時切割甲和乙，避免發(fā)生_______，而獲得更多的重組質粒。將重組質粒導入大腸桿菌之前，需用Ca2+處理，使細胞處于_______的生理狀態(tài)，稱為感受態(tài)。完成導入一段時間后，從大腸桿菌細胞中提取蛋白質，采用_______技術進行檢測，若有雜交帶出現(xiàn)則表明干擾素基因成功表達。

Answer 1

【答案】單細胞、繁殖快、遺傳物質較少 逆轉錄 cDNA文庫 體外DNA克隆不需要解旋酶（高溫變性解旋） DNA雙鏈完全解開后再復制（不是邊解旋邊復制） 質粒和目的基因的自身連接（質粒和質粒之間、目的基因和目的基因之間的連接） 能吸收周圍環(huán)境中的DNA分子 抗原-抗體雜交

【解析】

基因工程是在分子水平上對基因進行操作的復雜技術，是將外源基因通過體外重組后導入受體細胞內，使這個基因能在受體細胞內復制、轉錄、翻譯表達的操作�；�因工程四步驟包括：目的基因的獲取、基因表達載體的構建、將目的基因導入受體細胞、目的基因的檢測與表達；

分析題圖可知，過程①表示逆轉錄；過程②表示PCR中的變性階段，使模板DNA變?yōu)閱捂�；過程③表示PCR中的退火和延伸階段，使引物和模板DNA結合形成新的DNA；過程④表示新合成的DNA繼續(xù)作為模板DNA參與復制擴增；

（1）大腸桿菌因其具有單細胞、繁殖快、遺傳物質較少的特點被用作基因工程的受體細胞；mRNA經過反轉錄可以獲得cDNA；如果用人體發(fā)育某個時期的mRNA獲得多種cDNA片段，與載體連接后儲存在一個受體菌群中，這個受體菌群體叫做cDNA文庫；

（2）②③④表示PCR技術的DNA克隆，與體內DNA復制相比，體外DNA克隆不需要解旋酶，而是利用高溫變性解旋；DNA克隆是將DNA雙鏈完全解開后再復制，而不是邊解旋邊復制；

（3）常用兩種限制酶切割DNA片段和質粒的目的是防止質粒和目的基因的自身連接；用Ca2+處理大腸桿菌是為了使其能吸收周圍環(huán)境中的DNA分子的生理狀態(tài)，稱為感受態(tài)細胞；導入目的基因并提取蛋白質后，采用抗原-抗體雜交技術檢測目的基因的表達。