Question

10．基因工程技術包括一系列的分子生物學操作步驟．請回答下列問題：
（1）基因工程操作的核心步驟是構建基因表達載體．
（2）限制酶、DNA連接酶和運載體是基因工程的基本操作工具．其中限制酶的特點是能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，在特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開（或在特定的部位斷開）．
（3）Mullis教授因發(fā)明PCR技術獲1993年諾貝爾獎，PCR技術中需要的酶是熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶），若PCR進行20輪循環(huán)，理論上可獲得2²⁰個基因片段．
（4）將目的基因導入動物受體細胞的方法是顯微注射法．
（5）周光宇教授提出的花粉管通道法為我國的轉基因抗蟲棉作出重要貢獻，請寫出分子水平檢測抗蟲基因是否表達的方法抗原-抗體雜交技術．

Answer 1

分析 1、基因工程的工具：
（1）限制酶：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．
（2）DNA連接酶：連接的是兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵．
（3）運載體：常用的運載體：質粒、噬菌體的衍生物、動植物病毒．
2、基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）基因工程操作的核心步驟是構建基因表達載體．
（2）限制酶、DNA連接酶和運載體是基因工程的基本操作工具．限制酶的特點是能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．
（3）PCR技術中需要的酶是熱穩(wěn)定DNA聚合酶；PCR的原理是DNA分子復制，若PCR進行20輪循環(huán)，理論上可獲得2²⁰個基因片段．
（4）將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法．
（5）分子水平檢測抗蟲棉基因是否表達的方法為抗原-抗體雜交技術．
故答案為：
（1）構建基因表達載體
（2）運載體      能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，在特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開（或在特定的部位斷開）
（3）熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）     2²⁰
（4）顯微注射法
（5）抗原-抗體雜交技術

點評 本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能結合所學的知識準確答題．