Question

6．請根據(jù)現(xiàn)代生物工程技術回答下列問題：
（1）基因工程技術中對已獲得的目的基因，常采用PCR技術大量擴增．該技術的基本過程是：目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈，引物與單鏈相應互補序列結合，然后在DNA聚合酶的作用下進行互補鏈的合成（或延伸）（或子鏈的合成），如此重復循環(huán)多次．
（2）限制酶Smal能識別如圖，并在圖中箭頭位置切斷DNA．

用限制酶Smal切割獲取的目的基因需用T₄DNA連接酶構建基因表達載體．
（3）培育轉(zhuǎn)基因小鼠除利用基因工程技術之外還需用到早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等技術．
（4）制備單克隆抗體通常選用細胞融合技術，使（經(jīng)抗原刺激）B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，融合成功的細胞經(jīng)過篩選就是所需要的雜交瘤細胞．

Answer 1

分析 1、PCR技術擴增目的基因的過程是：目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈，引物與單鏈相應互補序列結合，然后在熱穩(wěn)定性DNA聚合酶（Taq酶）作用下進行延伸，如此重復循環(huán)多次，使目的基因的量呈指數(shù)（2ⁿ）增長．
2、構建基因表達載體時，用限制酶切割DNA后可能產(chǎn)生黏性末端，也可能產(chǎn)生平末端；平末端需用T₄DNA連接酶將雙鏈DNA片段“縫合”起來．“縫合”的過程，就是恢復被限制酶切開的兩個脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵的過程．

解答 解：（1）PCR技術擴增目的基因的過程是：目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈，引物與單鏈相應互補序列結合，然后在熱穩(wěn)定性DNA聚合酶（Taq酶）作用下進行延伸，如此重復循環(huán)多次，使目的基因的量呈指數(shù)（2ⁿ）增長．
（2）如圖，限制酶Smal在圖中箭頭位置切斷DNA，獲取平口末端．構建基因表達載體時，用限制酶切割DNA后可能產(chǎn)生黏性末端，也可能產(chǎn)生平末端；平末端需用T₄DNA連接酶將雙鏈DNA片段“縫合”起來．
（3）培育轉(zhuǎn)基因小鼠過程涉及到的技術有：基因工程、胚胎培養(yǎng)、胚胎移植．
（4）制備單克隆抗體時，將具有免疫能力的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，融合成功的細胞經(jīng)過篩選，獲取能大量繁殖并能產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細胞．
故答案為：
（1）引物   互補鏈的合成（或延伸）  （或子鏈的合成）
（2）T₄DNA連接
（3）早期胚胎培養(yǎng)  胚胎移植
（4）（經(jīng)抗原刺激）B淋巴   骨髓瘤    雜交瘤

點評 本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)問題；本題還結合利用胚胎干細胞培育轉(zhuǎn)基因小鼠，該過程涉及到基因工程、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植各技術．