7．（5分）回答下列有關(guān)基因工程的問題。

(1)四種質(zhì)粒含有El和E2兩種限制酶的識別位點，表示抗青霉素的抗性基因，表示抗四環(huán)素的抗性基因，這四種質(zhì)粒除抗性基因外長度相等。若將兩端用E1切開的基因與用El切開的質(zhì)粒X-l混合連接，連接后獲得的質(zhì)粒類型有_________。（多選）

A. X-1        B. X-2        C. X-3        D. X-4

(2)若將上圖所示Xl、X-2、X-3、X-4四種質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌，然后分別涂布在含有青霉素或四環(huán)素的兩種培養(yǎng)基上。在這兩種培養(yǎng)基上均不能生長的大腸桿菌細胞類型有_________、___________.

(3)如果X-1，用El酶切，產(chǎn)生850對堿基和3550對堿基兩種片斷：那么質(zhì)粒(X-2基因的

長度為1200對堿基）用E2酶切后的片段長度為___________對堿基。

(4）若將外源的基因兩端用E2切開，再與用EZ切開的。x-1混合連接，并導(dǎo)入大腸桿菌細胞，結(jié)果顯示，含X-4的細胞數(shù)與含X-I的細胞數(shù)之比為1：3，增大DNA連接酶用量能否提高上述比值？____________。

6．（12分）多聚半乳糖醛酸酶(PG)，能降解果膠使細胞壁破損。番茄果實成熟中，PG合成顯著增加，能使果實交紅變軟，但不利于保鮮，可利用基因工程的方法以其進行改造。請據(jù)圖l回答：

提取目的基因

①若已獲取PG的mRNA，可通過______獲取PG基因。

②在該基因上游加結(jié)構(gòu)A可確保基因的反義轉(zhuǎn)錄，結(jié)構(gòu)A上應(yīng)具有________酶結(jié)合位點。得到的目的基因兩側(cè)需人工合成BamHI黏性末端。已知BamHI的識別序列如圖2-甲所示，請在圖2-乙相應(yīng)位置上，畫出目的基因兩側(cè)的黏性末端。

③重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中的目的是_____________________________________.

(2)用含目的基因的農(nóng)稈菌感染番茄原生質(zhì)體后，可用培養(yǎng)基進行篩選。培養(yǎng)24-48h后取樣，在質(zhì)量分數(shù)為25%的蔗糖溶液中，觀察細胞__________現(xiàn)象來鑒別細胞壁是否再生。

(3)由于導(dǎo)入的目的基因能轉(zhuǎn)錄反義RNA，且能與_____________互補結(jié)合，抑制PG基因的正常表達。若轉(zhuǎn)基因番茄的保質(zhì)期比非轉(zhuǎn)基因番茄__________，則可確定轉(zhuǎn)基因番茄成功。

(4)獲得的轉(zhuǎn)基因番茄產(chǎn)生的種子不一定保留目的基因，科研人員常采用__________技術(shù)手段使子代保持轉(zhuǎn)基因的優(yōu)良性狀。

(5)改造過程需要的工具酶有_______________，如果在此過程中形成的是平末端，則起“縫合作用的酶是_________________________.

(6)在構(gòu)建基因表達載體時，除了插入目的基因外，基因表達載體中還需含有___________，在該番茄薪品種的培育過程中，將目的基因?qū)�入受體細胞的方法叫做___________。

（4分）轉(zhuǎn)基因抗病香蕉的培育過程如圖所示。質(zhì)粒上有Pst I、Sma I、EcoRI、Apa I等四種限制酶切割位點。請回答：

1)構(gòu)建含抗病基因的表達載體A時，應(yīng)選用限制酶____________，對____________進行切割。

2)培養(yǎng)基中的卡那霉素會抑制香蕉愈傷組織細胞的生長，欲利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入抗病基因的香蕉細胞，應(yīng)使基因表達載體A中含有_________，作為標記基因。

3)圖中①、②依次表示組織培養(yǎng)過程中香蕉組織細胞的_______________________過程。

4．（6分）胚胎工程技術(shù)包含的內(nèi)容很豐富，如圖是胚胎工程技術(shù)研究及應(yīng)用的相關(guān)情況，其中供體l是良種荷斯坦高產(chǎn)奶牛，供體2是黃牛，請據(jù)圖回答下列問題；

l)應(yīng)用1中獲得的小牛，其遺傳物質(zhì)來源于_________，為一次獲得多個細胞B，往往需要向

共體2內(nèi)注入的是促性腺激素，而不是性激素，原因是________________________.

2)通過應(yīng)用2獲得小牛，涉及到胚胎工程的最后一道“工序”是________________.

3)應(yīng)用3中的細胞D取自囊胚的_______，細胞C取自牛胎兒的________________.

4)應(yīng)用4中獲得二分胚①和②，移植到受體牛中得到兩只小牛，兩只小牛的性別是_________

的（“相同”或“不同”）。

3．（8分）2n/4n嵌合體胚胎是指用四倍體(4n)胚胎與二倍體胚胎(2n，或胚胎干細胞(ES細胞）進行聚合，形成由二倍體和四倍體細胞組成的嵌合體。2n/4n嵌合體胚胎的構(gòu)建常用方法如下圖，請據(jù)圖分析回答：

(l)受精卵是胚胎發(fā)育的開端，圖中的卵母細胞達到_________時期，才具備受精的能力，而精子需經(jīng)過___________過程才能和卵母細胞結(jié)合，

(2)2N的ES細胞來自胚胎發(fā)育過程的__________期，本實驗中從功能上說明了該細胞________

(3)2n/4n嵌合體胚胎的構(gòu)建用到的現(xiàn)代生物工程技術(shù)主要有：____________________

(4)ES細胞經(jīng)嵌合體方法培育的動物與核移植方法培育的動物相比，遺傳物質(zhì)來源的區(qū)別主要是什么？_______________________________________

2．（6分）人絨毛膜促性腺激素(HCG)是女性懷孕后胎盤滋養(yǎng)層細胞分泌的一種糖蛋白，制備抗HCG單克隆抗體可用于早孕的診斷。下圖是抗HCG單克隆抗體制備流程示意圖，請分析回答問題。

(1)制各單克隆抗體過程中，給小鼠注射的HCG相當于_________，使小鼠產(chǎn)生分泌相應(yīng)__________的淋巴細胞，此過程屬于特異性免疫中的____________免疫。

(2)在細胞內(nèi)DNA的合成一般有兩條途徑，主途徑是在細胞內(nèi)由糖和氨基酸合成核苷酸，進而合成DNA，而氨基瞟呤可以阻斷此途徑。另一輔助途徑是在次黃嘌嶺和胸腺嘧啶核苷存在的情況下，經(jīng)酶催化作用合成DNA,而骨髓瘤細胞的DNA合成沒有此輔助途徑。

①利用DNA合成途徑不同的特點配制的HAT培養(yǎng)基含有多種成分，其中添加的________

成分具有篩選雜交瘤細胞的作用。

②最終篩選獲得的雜交瘤細胞的特點是_______________________________________。

(3)此過程生產(chǎn)的單克隆抗體可以與_________。特異性結(jié)合，從而診斷早孕。

1．（6分）下圖列舉了幾種植物的育種方式，請據(jù)圖回答相關(guān)問題。

(l)（甲+�。┯�種方式稱為_______________________________________________

(2)通過丁種方式可以獲得脫毒苗，培養(yǎng)過程中c常常取用莖尖的原因是______________。

(3)乙方式通常用射線處理植物的愈傷組織能獲得較好效果，原因是___________________。

(4)若a為白菜體細胞，b為甘藍體細胞，通過（甲+丁）方法培育出的新植株既有白菜生長期短的優(yōu)點，又有甘藍易于儲存的特性，從分子水平來說，這是由于_____________。

(5)通過甲、丁方法培育出的新植物體能結(jié)種子，是因為______________________。

(6)甲、丙兩種育種方式與傳統(tǒng)雜交育種相比，其優(yōu)點是___________________。

50．北極比目魚中有抗凍基因。慕編碼的抗凍蛋白的氨基酸序列中某區(qū)域為11個氨基酸的重復(fù)序列，該序列重復(fù)次數(shù)越多，抗凍能力越強。下圖是獲取轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株的過程示意圖，有關(guān)敘述正確的是（　�。�

A．過程①獲取的目的基因，可用于基因工程中對比目魚基因組測序

B．將多個抗凍基因編碼區(qū)依次相連成新基因，不能得到抗凍性增強的抗凍蛋白

C．過程②構(gòu)成的重組質(zhì)粒缺乏標記基因，需要轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌才能進行篩選

D．應(yīng)用DNA探針技術(shù)，可以檢測轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株中目的基因的存在及其完全表達

49．英國科學(xué)家利用生物工程技術(shù)，發(fā)明了～種名為“我的皮膚”的生物活性繃帶，為皮膚燒傷病人帶來福音。該活性繃帶的原理是先采集一些細胞標本，再讓其在特殊膜片上增殖，5~7天后，將膜片敷到患者傷口上，膜片會將細胞逐漸“釋放”，到傷口處，并促進新生皮膚層生長，達到愈合傷口的目的。下列有關(guān)敘述中，不正確是( )

A．人的皮膚燒傷后容易引起感染，主要是由于非特異性免疫機能受損導(dǎo)致的

B．種植在膜片上的細胞樣本最好選來自本人的干細胞

C．膜片能否將細胞順利“釋放”到傷口與患者自身皮膚愈合，與兩者細胞膜上的糖蛋白有關(guān)

D．若采用異體皮膚移植會導(dǎo)致排異反應(yīng)，主要是由于機體特異性免疫產(chǎn)生相應(yīng)的抗體

48．右圖為細胞融合的簡略過程（只考慮兩個細胞的融合）。若A、B分別是基因型為Hhrr、hhRr的兩個煙草品種的花粉，且這兩對基因分別位于兩對同源染色體上，由于一對隱性純合基因(rr或hh)的作用，在光照強度大于8001x時，都不能增殖。下列敘述中正確的是

①實驗開始時必須用纖維素酶和果膠酶除去不利于質(zhì)生質(zhì)體融合的物質(zhì)

②要想從融合細胞的培養(yǎng)液中分離出基因型為HhRr的雜種細胞，可在大于800 lx光照下培養(yǎng)，收集增殖分化的細胞團

③從理論上分析考慮，將融合細胞的培養(yǎng)液放在夫干800lx光照下培養(yǎng)，有3種基因型的融合細胞不能增殖分化

A．①②③

B．②③

C．①②

D．①③