Question

【題目】Ⅰ.同學(xué)從溫度為55～65℃的泉 水中篩選出能合成脂肪酶的細(xì)菌，并從該細(xì)菌中提取了脂肪酶。回答問題：

（1）測(cè)定脂肪酶活性時(shí)，應(yīng)選擇________________作為該酶作用的物質(zhì)，反應(yīng)液中應(yīng)加入________________溶液以維持其酸堿度穩(wěn)定。

（2）要鑒定該酶的化學(xué)本質(zhì)，可將該酶液與雙縮脲試劑混合，若反應(yīng)液呈紫色，則該酶的化學(xué)本質(zhì)為________________。

（3）根據(jù)該細(xì)菌的生活環(huán)境，簡(jiǎn)要寫出測(cè)定該酶催化作用最適溫度的實(shí)驗(yàn)思路。_____________________________

Ⅱ.依據(jù)表中結(jié)果，金屬離子________________對(duì)該酶的活性有一定的促進(jìn)作用。金屬離子對(duì)酶的活性有促進(jìn)或抑制作用，可能的原因是______________________________________。

Answer 1

【答案】脂肪緩沖蛋白質(zhì)在一定溫度范圍內(nèi)（包括55～65℃）設(shè)置溫度，分別測(cè)量酶活性，若所測(cè)數(shù)據(jù)出現(xiàn)內(nèi)峰值，則峰值所對(duì)應(yīng)的溫度即為該酶催化化用的最適溫度。否則,擴(kuò)大溫度范圍。繼續(xù)實(shí)驗(yàn)，直到出現(xiàn)峰值Mn2+金屬離子與酶結(jié)合可以改變酶的空間結(jié)構(gòu)

【解析】

根據(jù)酶的專一性，要測(cè)定脂肪酶的活性則需要脂肪為底物；若進(jìn)一步測(cè)定酶的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)，則需要用檢測(cè)蛋白質(zhì)的試劑——雙縮脲試劑，若出現(xiàn)紫色則為蛋白質(zhì)。若還要測(cè)定脂肪酶的最適溫度，則需要在適宜的PH等環(huán)境條件下，結(jié)合脂肪酶有活性的溫度范圍內(nèi)設(shè)置一系列溫度梯度，若出現(xiàn)活性峰值，則確定為該酶的最適溫度。

Ⅰ.（1）測(cè)定脂肪酶活性，應(yīng)該以脂肪為唯一底物，讓脂肪酶進(jìn)行作用；緩沖溶液可以維持反應(yīng)液中酸堿度的穩(wěn)定。

（2）用雙縮脲試劑的特異性檢測(cè)，若反應(yīng)呈現(xiàn)紫色則為蛋白質(zhì)，即說明該酶的化學(xué)本質(zhì)為蛋白質(zhì)。

（3）運(yùn)用控制變量法，以溫度為自變量，酶的活性為因變量，在一定溫度范圍（包括55℃~65℃）內(nèi)設(shè)置溫度梯度，分別測(cè)定酶的活性，若得到數(shù)據(jù)的峰值，峰值對(duì)應(yīng)的即為酶催化作用的最適溫度。否則，需擴(kuò)大溫度范圍，繼續(xù)實(shí)驗(yàn)，直到出現(xiàn)峰值。

Ⅱ.根據(jù)表格數(shù)據(jù)，當(dāng)培養(yǎng)基中添加Mn2+時(shí)，能使該酶的活性升高（比對(duì)照組的活性100高），說明Mn2+對(duì)該酶的活性有一定的促進(jìn)作用。金屬離子是通過與酶結(jié)合后，改變酶空間結(jié)構(gòu)來影響酶活性的。