Question

【題目】聚乳酸（PLA）/聚己二酸對(duì)苯二甲酸丁二酯（PBAT）地膜在農(nóng)業(yè)上有廣泛的應(yīng)用，但若不采取措施處理，容易造成地膜在土壤中大量累積，影響土壤生態(tài)環(huán)境�，F(xiàn)欲從土壤中篩選出PLA/PBAT降解菌，使用的培養(yǎng)基如下：PLA/PBAT 10.0 g·L－1，KH2PO41.0 g·L－1，Na2HPO41.5 g·L－1，NH4Cl 2.0 g·L－1，CaCl2·2H2O 0.1 g·L－1，KCl 0.2 g·L－1，MgSO4·7H2O 0.2 g·L－1，pH7.2～7.4。回答下列問(wèn)題：

（1）從功能上看，上述培養(yǎng)基屬于_________。其中，PLA/PBAT可為微生物的生長(zhǎng)提供________，除此之外，微生物生長(zhǎng)需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)還有生長(zhǎng)因子、____________。

（2）將土壤配制成菌懸液，取上清液接種于上述培養(yǎng)基中培養(yǎng)至培養(yǎng)基渾濁，該步驟的目的是________________________。

（3）若要制作無(wú)菌平板，上述培養(yǎng)基中還需加入____________，對(duì)培養(yǎng)基采取的滅菌方法是____________。接種培養(yǎng)后，在培養(yǎng)基上形成的全部菌落不一定是一個(gè)種群，其原因是________________________________。

Answer 1

【答案】選擇培養(yǎng)基??? 碳源??? 水、氮源、無(wú)機(jī)鹽??? 增加PLA/PBAT降解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離出所需微生物??? 瓊脂??? 高壓蒸汽滅菌法??? 土壤中 能夠降解PLA/PBAT的微生物可能不止一種（或還有以PLA/PBAT降解產(chǎn)物為碳源的微生物，或自養(yǎng)型微生物）???

【解析】

1、培養(yǎng)基的成分有碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽和生長(zhǎng)因子。篩選目的微生物需要在富含目的微生物的環(huán)境中取樣，用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。

2、滅菌的方法主要有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。灼燒滅菌適合于接種工具的滅菌，一般來(lái)說(shuō)是在操作過(guò)程中金屬類(lèi)的接種工具。干熱滅菌適合于玻璃器皿、金屬工具的滅菌。高壓蒸汽滅菌適合于玻璃器皿、接種工具以及培養(yǎng)基，特別注意培養(yǎng)基的滅菌只能用高壓蒸汽滅菌。

3、微生物常見(jiàn)的接種的方法：

①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

（1）從功能上看，上述培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。PLA/PBAT可為微生物的生長(zhǎng)提供碳源，除此之外，微生物生長(zhǎng)需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)還有水、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子。

（2）將土壤配制成菌懸液，取上清液接種于上述培養(yǎng)基中培養(yǎng)至培養(yǎng)基渾濁，可以增加PLA/PBAT降解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離出所需微生物。

（3）若要制作無(wú)菌平板，上述培養(yǎng)基還需加入瓊脂，對(duì)培養(yǎng)基采取的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌。接種培養(yǎng)后，由于土壤中能夠降解PLA/PBAT的微生物可能不止一種，或還有其它以PLA/PBAT降解產(chǎn)物為碳源的微生物，或自養(yǎng)型微生物，故它們?cè)谂囵B(yǎng)基上形成的菌落不一定為一個(gè)種群。