Question

2．某實驗小組對某種品牌的牛奶中大腸桿菌的數(shù)量進行了測定，取3支滅菌的試管，分別加入9mL無菌水，標號為A₁、A₂、A₃，從250mL牛奶中吸取1mL牛奶樣液加入試管A₁中，搖勻，然后另取一只吸管從A₁中吸取1mL溶液，加入A₂中，搖勻，以此類推，最后從試管A₃中取0.1mL樣液對平板進行涂布，鑒別并計數(shù)大腸桿菌菌落．對涂布的三個平板進行統(tǒng)計，大腸桿菌菌落數(shù)分別為35、34、42個．請回答下列問題：
（1）本實驗中培養(yǎng)大腸桿菌除了必要的營養(yǎng)物質(zhì)和瓊脂外，還需在培養(yǎng)基中添加伊紅美藍．
（2）制備培養(yǎng)基過程中，對培養(yǎng)皿滅菌的常用方法是干熱滅菌法，倒平板時培養(yǎng)基的溫度不能太低，原因是溫度太低導(dǎo)致培養(yǎng)基凝固，無法在培養(yǎng)皿中鋪展均勻．
（3）該實驗小組接種大腸桿菌所采用的方法是稀釋涂布平板法．根據(jù)三個平板中菌落數(shù)，可推測原250mL牛奶中大腸桿菌的濃度為3.7×10⁸個/L（計算過程中液體混合時不考慮體積變化），該方法測定的大腸桿菌的含量和實際值相比，一般偏�。ㄌ睢捌�大”或“偏小”）
（4）為了使測量結(jié)果更加準確，該實驗對照組的設(shè)置是設(shè)一組沒有涂布（接種）的培養(yǎng)基（或用等量無菌水涂布的培養(yǎng)基）．
（5）若要用牛奶制作酸奶，接種乳酸菌菌種．

Answer 1

分析 1、培養(yǎng)基按按功能分：

種類	制備方法	特征	用途
選擇培養(yǎng)基	培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)成分	根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率	加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌
鑒別培養(yǎng)基	加入某種試劑或化學(xué)藥品	依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化而設(shè)計	鑒別和區(qū)分菌落相似的微生物伊紅和美藍培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌

2、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落．
3、統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法
（1）顯微鏡直接計數(shù)法
 ①原理：利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計數(shù)板計數(shù)； ③缺點：不能區(qū)分死菌與活菌．
（2）間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）
 ①原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌．通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌．
②操作
a、設(shè)置重復(fù)組，增強實驗的說服力與準確性．
b、為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)．
③計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)．

解答 解：（1）伊紅和美藍培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌，因此本實驗中培養(yǎng)大腸桿菌除了必要的營養(yǎng)物質(zhì)和瓊脂外，還需在培養(yǎng)基中添加伊紅美藍．
（2）對培養(yǎng)皿滅菌的常用干熱滅菌法；倒平板時培養(yǎng)基的溫度不能太低，因為溫度太低會導(dǎo)致培養(yǎng)基凝固，無法在培養(yǎng)皿中鋪展均勻．
（3）接種微生物常用平板劃線法或稀釋涂布平板法，其中稀釋涂布平板法可用于微生物的計數(shù)，因此該實驗小組接種大腸桿菌所采用的方法是稀釋涂布平板法．根據(jù)三個平板中菌落數(shù)，可推測原250mL牛奶中大腸桿菌的濃度為 $\frac{35+34+42}{3}×10×10×10×10$×10³=3.7×10⁸個/L；由于兩個或多個細胞連在一起時，觀察到的是一個菌落，因此該方法測定的大腸桿菌的含量和實際值相比，一般偏小．
（4）為了使測量結(jié)果更加準確，該實驗對照組的設(shè)置是設(shè)一組沒有涂布（接種）的培養(yǎng)基（或用等量無菌水涂布的培養(yǎng)基）．
（5）若要用牛奶制作酸奶，接種乳酸菌菌種．
故答案為：
（1）伊紅美藍
（2）干熱滅菌法      溫度太低導(dǎo)致培養(yǎng)基凝固，無法在培養(yǎng)皿中鋪展均勻
（3）稀釋涂布平板法    3.7×10⁸    偏小
（4）設(shè)一組沒有涂布（接種）的培養(yǎng)基（或用等量無菌水涂布的培養(yǎng)基）
（5）乳酸菌

點評 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識記培養(yǎng)基的成分、種類及功能；識記接種微生物常用的兩種方法，掌握微生物計數(shù)的方法，能結(jié)合所學(xué)的知識準確答題．