Question

8．Rag₂基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞．科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)Rag₂基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療．其技術(shù)流程如圖1：

（1）步驟①中，在核移植前應(yīng)去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核．
（2）步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期時(shí)，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出ES細(xì)胞．
（3）步驟③中，導(dǎo)入基因前可以利用PCR技術(shù)擴(kuò)增Rag₂基因片段．圖2為質(zhì)粒限制酶酶切圖譜．Rag₂基因不含圖中限制酶識(shí)別序列．為使PCR擴(kuò)增的Rag₂基因重組進(jìn)該質(zhì)粒，擴(kuò)增的Rag₂基因兩端需分別引入NdeⅠ和BamHⅠ不同限制酶的識(shí)別序列．PCR反應(yīng)體系中含有熱穩(wěn)定DNA聚合酶，下面的表達(dá)式不能正確反映DNA聚合酶的功能，這是因?yàn)镈NA聚合酶只能將單個(gè)脫氧核苷酸連續(xù)結(jié)合到雙鏈DNA片段的引物鏈上．

（4）為檢測(cè)Rag₂基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)，用抗Rag₂蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)．
（5）利用ES細(xì)胞能培育出造血干細(xì)胞，其根本原理是誘導(dǎo)基因選擇性表達(dá)．在體外誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)液中需加入血漿、血清等天然成分．

Answer 1

分析 分析圖1：①表示核移植過程；②表示早期胚胎培養(yǎng)過程；③表示將目的基因?qū)�入ES細(xì)胞．
分析圖2：表示質(zhì)粒限制酶酶切圖譜．基因表達(dá)載體的組成：目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因．啟動(dòng)子是RNA聚合酶特異性識(shí)別和結(jié)合的DNA序列，是基因的一個(gè)組成部分，控制基因表達(dá)（轉(zhuǎn)錄）的起始時(shí)間和表達(dá)的程度．終止子是給予RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)的DNA序列．

解答 解：（1）核移植是將體細(xì)胞核移植到去核的卵母細(xì)胞中，所以實(shí)驗(yàn)前要去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核．
（2）內(nèi)細(xì)胞團(tuán)位于囊胚中，所以重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期．
（3）在基因表達(dá)載體的構(gòu)建中，目的基因插入到啟動(dòng)子和終止子之間，啟動(dòng)子和終止子之間有Ndel、XbaⅠ、BamHⅠ三種限制酶識(shí)別和切割位點(diǎn)．據(jù)圖可知，終止子的兩端有XbaⅠ限制酶切割位點(diǎn)，因此不能使用XbaⅠ限制酶切割質(zhì)粒，故只能用Ndel和BamHⅠ限制酶切割質(zhì)粒．目的基因與質(zhì)粒具有相同的粘性末端才可以連接形成重組質(zhì)粒，所以目的基因兩端需分別引入Ndel和BamHⅠ的識(shí)別序列．圖中直接將兩個(gè)脫氧核苷酸合成DNA單鏈，這不能反映DNA聚合酶的功能，因?yàn)镈NA聚合酶只能在DNA模板存在的條件下，將單個(gè)脫氧核苷酸連續(xù)結(jié)合到雙鏈DNA片段的引物鏈上．
（4）基因表達(dá)的產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，所以提取小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原-抗體雜交．
（5）利用ES細(xì)胞能培育出造血干細(xì)胞，其根本原理是誘導(dǎo)基因選擇性表達(dá)．在體外誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)液中需加入血漿、血清等天然成分．
故答案為：
（1）細(xì)胞核
（2）囊胚
（3）NdeⅠBamHⅠDNA聚合酶只能將單個(gè)脫氧核苷酸連續(xù)結(jié)合到雙鏈DNA片段的引物鏈上
（4）蛋白質(zhì)
（5）誘導(dǎo)基因選擇性表達(dá)     血漿、血清

點(diǎn)評(píng) 本題考查了胚胎工程和基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生的識(shí)圖能力和理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)，把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系，形成知識(shí)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)，準(zhǔn)確判斷問題的能力．