Question

7．基因工程又稱基因拼接技術和DNA重組技術，包括以下幾個環(huán)節(jié)：目的基因的獲取→基因表達載體的構建→將目的基因導入受體細胞→目的基因的檢測與鑒定．回答下列相關問題：
（1）在基因工程中，獲取目的基因主要有兩大途徑，即人工合成和從生物材料中分離．如果利用某植物為材料，同時構建cDNA文庫和基因組文庫，兩者相比cDNA文庫中含有的基因數(shù)目比基因組文庫中的少（多/少）．
（2）在構建基因表達載體時，經常使用質粒載體作為基因工程的工具，其應具備的基本條件有能夠自我復制、具有標記基因、具有一個至多個限制酶切割位點（答出兩點即可）．除滿足上述基本條件外，還需具有啟動子和終止子．啟動子是RNA聚合酶識別并結合的部位．這一步驟中通常還會利用到DNA連接酶，常見的有E•coliDNA連接酶和T₄DNA連接酶，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是T₄DNA連接酶．
（3）將目的基因導入受體細胞時，如果受體為植物細胞，采用最多的方法是農桿菌轉化法，如果受體為動物細胞，采用最多的方法是顯微注射技術．
（4）最后，要檢測轉基因生物的DNA上是否插入了目的基因，經常采用的檢測方法是DNA分子雜交技術．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）在基因工程中，獲取目的基因主要有兩大途徑，即人工合成和從生物材料中分離．cDNA文庫和基因文庫的比較表：

文庫類型	cDNA	基因組文庫
文庫大小	小	大
基因中啟動子	無	有
基因中內含子	無	有
基因多少	某種生物的部分基因	某種生物的全部基因
物種間的基因交流	可以	部分基因可以

由此客家，cDNA文庫中含有的基因數(shù)目比基因組文庫中的少．
（2）作為基因工程的運載體應具備的基本條件有：能夠自我復制、具有標記基因、具有一個至多個限制酶切割位點等．除滿足上述基本條件外，還需具有啟動子和終止子，其中啟動子是RNA聚合酶識別并結合的部位．構建基因表達載體時，需要用DNA連接酶將目的基因與運載體連接形成重組DNA，DNA連接酶根據(jù)來源不同分為E•coliDNA連接酶和T₄DNA連接酶，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是T₄DNA連接酶．
（3）將目的基因導入植物細胞采用農桿菌轉化法，將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法．
（4）最后，要檢測轉基因生物的DNA上是否插入了目的基因，經常采用DNA分子雜交技術．
故答案為：
（1）人工合成    少
（2）能夠自我復制、具有標記基因、具有一個至多個限制酶切割位點      RNA聚合     T₄DNA連接酶
（3）農桿菌轉化法    顯微注射技術
（4）DNA分子雜交技術

點評 本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的概念、原理、操作工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能構建知識網(wǎng)絡，再結合所學的知識準確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．