Question

【題目】地溝油最大的來源為城市飯店下水道的隔油池，用脂肪酶處理地溝油具有廣泛的應用前景。為獲得高產脂肪酶的菌株，并將其應用于含地溝油的污水處理，某研究小組進行了一些實驗。請回答下列問題：

（1）欲分離篩選出能分泌脂肪酶的細菌，應配制以脂肪為____________的固體培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基從功能上看屬于____________培養(yǎng)基。

（2）經過稀釋，在平板上加入0．1mL稀釋液并涂布，經適當時間培養(yǎng)后，在平板上計數菌落，據此可計算出每毫升培養(yǎng)液中的活菌數。這種計數方法得到的結果一般比實際值偏小，其原因可能有____________、____________。

（3）經上述實驗得到如下表所示的結果：

稀釋倍數	101	102	103	104	105	106
培養(yǎng) 結果
計數 （平均值）	難以計數	難以計數	難以計數	159	17	2

為保證結果準確，一般選擇表中的稀釋倍數為____________的平板進行統(tǒng)計。某同學認為“稀釋操作時，可以將1mL培養(yǎng)液加適量無菌水直接稀釋至所選擇的稀釋倍數，這樣可以簡化步驟，省去梯度稀釋的麻煩。”該同學的說法是否合理?請判斷并說明理由：_____________________。

Answer 1

【答案】唯一碳源 選擇 有的菌落是由2個或2個以上細菌形成的 涂布器上還殘留少量細菌 104 不合理，在做梯度稀釋之前不能確定這個稀釋倍數的每個平板的菌落是否在30~300之間

【解析】

1、培養(yǎng)基按功能分：

種類	制備方法	特征	用途
選擇培養(yǎng)基	培養(yǎng)基中加入某種化學成分	根據某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率	加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌
鑒別培養(yǎng)基	加入某種試劑或化學藥品	依據微生物產生的某種代謝產物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學藥品反應，產生明顯的特征變化而設計	鑒別和區(qū)分菌落相似的微生物伊紅和美藍培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌

2、微生物常見的接種的方法

①平板劃線法：將已經熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經培養(yǎng)后可形成單個菌落。

（1）欲分離篩選出能分泌脂肪酶的細菌，應配制以脂肪為唯一碳源的培養(yǎng)基；由于只要能分解脂肪的微生物能在這種培養(yǎng)基上生存，因此從功能上看，其屬于選擇培養(yǎng)基。

（2）采用稀釋涂布平板法得到的結果一般比實際值偏小，原因可能有有的菌落是由2個以上的細菌形成的、涂布器上還殘留少量細菌。

（3）根據表中培養(yǎng)結果可知，稀釋倍數為104時，培養(yǎng)基中菌落彼此分散，能通過肉眼進行計數，且數目在30-300之間，因此為保證結果準確，一般選擇104稀釋倍數的平板進行統(tǒng)計。由于在做梯度稀釋之前不能確定這個稀釋倍數的每個平板的菌落是否在30～300之間，因此這種方法不合理。