Question

19．某重點實驗室課題研究組欲將一株野生雜草的抗病基因轉(zhuǎn)給一雙子葉農(nóng)作物．該農(nóng)作物含有高莖基因，植株過高容易倒伏，科學(xué)家欲通過基因工程操作抑制高莖基因的表達．基于上述目的科學(xué)家進行了基因工程的相關(guān)操作，結(jié)合所學(xué)知識分析下列問題：
（1）課題研究組已經(jīng)獲得了抗性基因，欲體外大量擴增該目的基因需采用PCR技術(shù)，該技術(shù)的基本反應(yīng)過程：目的基因受熱變性后解鏈為單鏈，引物與單鏈相應(yīng)互補序列結(jié)合，然后在Taq酶（熱穩(wěn)定性DNA聚合酶）的作用下進行延伸．
（2）基因工程操作的核心是基因表達載體的構(gòu)建，該過程用到的工具酶有DNA連接酶和限制酶．本研究中，欲將目的基因轉(zhuǎn)入受體細胞，常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）體外擴增目的基因可用PCR技術(shù)，該技術(shù)的基本反應(yīng)過程：目的基因受熱變性后解鏈為單鏈，引物與單鏈相應(yīng)互補序列結(jié)合，然后在Taq酶（熱穩(wěn)定性DNA聚合酶） 的作用下進行延伸．
（2）基因工程核心步驟是基因表達載體的構(gòu)建，該過程首先要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA和運載體，其次需要用DNA連接酶將目的基因與運載體連接形成重組DNA．將目的基因轉(zhuǎn)入植物細胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
故答案為：
（1）PCR      引物    Taq酶（熱穩(wěn)定性DNA聚合酶）  
（2）基因表達載體的構(gòu)建   DNA連接酶和限制酶      農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化

點評 本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識準確答題，屬于考綱識記層次的考查．