Question

15．絞股藍(lán)細(xì)胞中含有抗煙草花葉病毒（TMV）基因，可以合成一種抗TMV 蛋白，葉片對TMV 具有抗感染性．煙草是具有重要經(jīng)濟(jì)價值的雙子葉植物，由于TMV 的感染會導(dǎo)致大幅度減產(chǎn)．研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出了抗TMV 的煙草，主要流程如圖所示．

（1）理論上，基因組文庫含有生物的全部基因；而cDNA 文庫中含有生物的部分基因．
（2）科學(xué)家從絞股藍(lán)細(xì)胞中提取抗TMV 基因轉(zhuǎn)錄的RNA，然后合成目的基因．圖中①過程表示反轉(zhuǎn)錄．
（3）④過程將重組Ti 質(zhì)粒導(dǎo)入煙草體細(xì)胞的常用方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（4）由圖分析，在過程③構(gòu)建的重組Ti 質(zhì)粒上應(yīng)該含有的標(biāo)記基因是卡那霉素抗性基因，它的作用是具有鑒定和篩選導(dǎo)入目的基因成功的受體細(xì)胞的作用．
（5）過程⑥可采取抗原-抗體雜交的方法，檢測植株是否合成了抗TMV 蛋白．在個體水平的鑒定過程中，可通過接種煙草花葉病毒的方法來確定植株是否具有抗性．

Answer 1

分析 1、基因文庫是指將含有某種生物不同基因的許多DNA片段，導(dǎo)入到受體菌的群體中儲存，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因．
基因組文庫包含某種生物所有的基因；部分基因文庫包含某種生物的部分基因．如：cDNA文庫．
2、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
3、目的基因的檢測與鑒定：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）基因組文庫含有某種生物的全部基因；cDNA文庫中只含有該種生物的部分基因．
（2）過程①表示獲得的目的基因，是RNA通過反轉(zhuǎn)錄獲得DNA．
（3）將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的常用的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（4）過程⑤添加卡那霉素的作用是篩選含有目的基因的重組質(zhì)粒．可推知過程③構(gòu)建的重組Ti 質(zhì)粒上應(yīng)該含有的標(biāo)記基因是卡那霉素抗性基因，具有鑒定和篩選導(dǎo)入目的基因成功的受體細(xì)胞．
（5）過程⑥需要對表達(dá)的產(chǎn)生進(jìn)行鑒定，可采取抗原-抗體雜交，可檢測植株是否合成了抗TMV蛋白；若從個體水平鑒定，可通過接種煙草花葉病毒的方法來確定植株是否具有抗性．
故答案為：
（1）全部  部分    
（2）反轉(zhuǎn)錄     
（3）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法
（4）卡那霉素抗性      鑒定和篩選導(dǎo)入目的基因成功的受體細(xì)胞
（5）抗原-抗體雜交     接種煙草花葉病毒

點(diǎn)評 本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因文庫的種類，掌握兩種基因文庫的區(qū)別；識記PCR技術(shù)的條件；識記基因工程的具體操作步驟及相關(guān)細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．