Question

2012年諾貝爾醫(yī)學和生理學獎授予英國科學家約翰?戈登和日本科學家山中伸彌．約翰?戈登在20世紀60年代做過一個劃時代的實驗：把美洲爪蟾的小腸上皮細胞核注入去核的卵細胞，結果發(fā)現(xiàn)一部分卵依然可以發(fā)育成蝌蚪，其中的一部分蝌蚪可以繼續(xù)發(fā)育成為成熟的爪蟾．山中伸彌等科學家將四個關鍵基因轉入小鼠的成纖維細胞，使其變成多功能干細胞（iPS），這些干細胞可再轉化成老鼠體內(nèi)任何種類的細胞．回答下列問題：
（1）約翰?戈登之后，科學界利用該技術進行更多細胞核轉移實驗，復制出多種哺乳類動物．在哺乳動物的核轉移實驗中，一般通過

 

（物理方法）將受體細胞激活，使其進行細胞分裂和發(fā)育，當胚胎發(fā)育到

 

階段時，將胚胎移入受體（代孕）動物體內(nèi)．
（2）從卵巢中吸取的卵母細胞，一般要培養(yǎng)到

 

階段才能用于實驗．
（3）利用體細胞進行核移植技術的難度明顯高于胚胎細胞核移植的原因是

 

．
（4）在山中伸彌的實驗中，利用了逆轉錄病毒，該病毒的作用是

 

．
（5）一般情況下，體外擴增目的基因常用的方法是

 

．在動物細胞培養(yǎng)過程中，當貼壁細胞分裂生長到細胞表面相互接觸時，細胞會停止分裂增值，這種現(xiàn)象稱為細胞的

 

．要使貼壁的細胞從瓶壁上分離下來，需要用

 

處理．

Answer 1

考點：胚胎移植,PCR技術的基本操作和應用,基因工程的原理及技術,動物細胞與組織培養(yǎng)過程

專題：

分析：細胞分化程度越高，全能性越低；由于動物體細胞全能性受限制，因而因此利用體細胞進行核移植技術的難度明顯高于胚胎細胞核移植．
外源基因進入受體細胞得通過構建基因表達的載體來實現(xiàn)．構建基因表達的載體除了目的基因外還需要載體、工具酶．載體種類包括：質(zhì)粒、動植物病毒、噬菌體．

解答： 解：（1）在哺乳動物的核轉移實驗中，一般通過電脈沖（或電刺激）將受體細胞激活，使其進行細胞分裂和發(fā)育，當胚胎發(fā)育到桑葚胚或囊胚階段時，將胚胎移入受體（代孕）動物體內(nèi)．
（2）從卵巢中吸取的卵母細胞，一般要培養(yǎng)到MⅡ中期（減數(shù)分裂第二次分裂中期）階段才能用于實驗．
（3）動物細胞分化程度高，不容易恢復全能性，因此利用體細胞進行核移植技術的難度明顯高于胚胎細胞核移植．
（4）在山中伸彌的實驗中，利用了逆轉錄病毒，該病毒的作用是目的基因的載體．
（5）一般情況下，體外擴增目的基因常用的方法是PCR技術（多聚酶鏈式反應）．在動物細胞培養(yǎng)過程中，當貼壁細胞分裂生長到細胞表面相互接觸時，細胞會停止分裂增值，這種現(xiàn)象稱為細胞的接觸抑制．要使貼壁的細胞從瓶壁上分離下來，需要用胰蛋白處理．
故答案為：
（1）電脈沖（或電刺激）  桑葚胚或囊胚
（2）MⅡ中期（減數(shù)分裂第二次分裂中期）
（3）動物細胞分化程度高，不容易恢復全能性
（4）目的基因的載體
（5）PCR技術（多聚酶鏈式反應）  接觸抑制   胰蛋白

點評：本題考查了基因工程、細胞工程和胚胎工程等方面的知識，意在考查考生的識記能力，難度適中．考生要能夠識記胚胎移植所選用的早期胚胎；識記卵母細胞的準備時期；識記目的基因擴增的方法等．