Question

12．我國目前臨床使用的乙肝疫苗大多為基因工程疫苗，其有效成分是一種叫做乙肝表面抗原的蛋白質（S蛋白），對應的基因為s基因．請回答：
（1）在構建重組DNA分子時，要用限制性核酸內切酶處理s基因和載體DNA，并用DNA連接酶使兩者結合．將重組DNA分子導入到哺乳動物細胞，經篩選得到工程細胞．
（2）在細胞培養(yǎng)過程中，工程細胞在生長過程中有接觸抑制現象，需要定期使用胰蛋白酶處理，以便于分瓶培養(yǎng)．
（3）為提髙工程細胞培養(yǎng)的成功率，下列措施中不需采用的是A．
A．取單個細胞進行培養(yǎng)   B．加入胰島素
C．二氧化碳培養(yǎng)箱          D．加入動物血清
（4）由于哺乳動物細胞培養(yǎng)較難，成本較高，近些年科學家們又發(fā)明了“乳腺生物發(fā)生器”，進而從轉基因動物的乳汁中提取所需產品．在這種技術中，作為重組DNA分子受體細胞的一般是受精卵．

Answer 1

分析 1、基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、動物細胞培養(yǎng)的過程：取動物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個細胞→制成細胞懸液→轉入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細胞用酶分散為單個細胞，制成細胞懸液→轉入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)．
3、動物細胞培養(yǎng)的條件：
（1）無菌、無毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物．
（2）營養(yǎng)物質：糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質．
（3）溫度和PH：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4．
（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細胞代謝必需的）和5%的CO₂（維持培養(yǎng)液的PH）．

解答 解：（1）在構建重組DNA分子時，要用限制性核酸內切酶處理s基因和載體DNA，并用DNA連接酶使兩者結合．
（2）在動物細胞培養(yǎng)過程中存在接觸抑制現象，需要定期使用胰蛋白酶處理，以便于分瓶培養(yǎng)．
（3）A、取單個細胞進行培養(yǎng)不會提髙工程細胞培養(yǎng)的成功率，A錯誤；
B、胰島素能促進血糖進入組織細胞，因此提髙工程細胞培養(yǎng)的成功率，應該在培養(yǎng)基添加胰島素，B正確；
C、動物細胞培養(yǎng)時需要一定的氣體環(huán)境，因此需要放在二氧化碳培養(yǎng)箱，C正確；
D、動物細胞培養(yǎng)時，為了給細胞提供充足的營養(yǎng)，需要在培養(yǎng)基中加入動物血清，D正確．
故選：A．
（4）培育轉基因動物時，應該以受精卵作為受體細胞，因為受精卵的全能性最高．
故答案為：
（1）s基因和載體DNA      DNA連接
（2）接觸抑制      胰蛋白     
（3）A     
（4）受精卵

點評 本題考查基因工程和細胞工程的相關知識，要求考生識記基因工程的概念、操作工具及操作步驟；識記動物細胞培養(yǎng)的過程及條件，能結合所學的知識準確答題．