Question

【題目】某興趣小組對受污染的河流水體進行了大腸桿菌數目的測定。請回答問題：

（1）測定大腸桿菌活菌數目時，需制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中為細菌提供氮源的物質是______________。培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右才能用來倒平板，你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？_____________。等待平板冷卻凝固后，將平板倒過來放置的原因是____________________。為了鑒別大腸桿菌菌落，可向培養(yǎng)基中加入伊紅美藍作為指示劑，大腸桿菌的菌落呈現__________。

（2）為了便于統(tǒng)計污染嚴重的水體中活菌的數目，需將水樣進行適當稀釋，例如取水樣2mL，加入無菌水________mL制備稀釋倍數為101的稀釋液，并照此依次制備更高倍數的稀釋液。每個稀釋倍數的菌液取10mL進行過濾，然后將濾膜放置在培養(yǎng)基上。為了防止雜菌污染，稀釋、過濾和旋轉濾膜等操作都應該在__________進行。

（3）將放有濾膜的平板置于適宜條件下培養(yǎng)，每隔12h統(tǒng)計一次菌落數目，應選取菌落數目____________時的記錄作為結果。如果經過培養(yǎng)后稀釋倍數為102的4個平板上菌落數分別為43、47、42、48，那么每升河水中約含大腸桿菌_______個。用這種方法測定的菌落數量往往比實際活菌數量更_______，這是因為_____________。

（4）除了上述活菌計數法外，顯微鏡直接計數也是測定細菌數量的常用方法。利用血細胞計數板（2mm×2mm）、滴管、試管、顯微鏡等儀器進行研究，從試管中吸出培養(yǎng)液進行計數之前，應將_________________；采用抽樣檢測的方法，先_______________計數室上，再_______________________，讓培養(yǎng)液自行滲入計數室（厚度為0.1mm）；需稍等片刻，待____________________時，再將血細胞計數板放在顯微鏡下觀察計數。已知計數板每小格為0.1mm×0.1mm，經隨機檢測，五個小方格內細菌平均數為8.2個，則細菌密度_________個/L。

Answer 1

【答案】 牛肉膏和蛋白胨 手背觸摸不燙手 防皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，又可以避免培養(yǎng)基中的水分過快地揮發(fā) 黑色 18 酒精燈火焰附近 穩(wěn)定 4.5×105 少 當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的是一個菌落 試管輕輕振蕩幾次 將蓋玻片放在 將吸取的培養(yǎng)液滴于蓋玻片邊緣 細胞全部沉降到計數室底部 8.2×109

【解析】試題分析：本題主要考查牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的制備，制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的一般步驟是：計算、稱量、溶化、調pH、滅菌、倒平板。對大腸桿菌用稀釋平板進行計數，計數時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細胞分散開，再利用計算公式：1毫升（克）樣品中的菌株數=（C÷V）×M，算出大腸桿菌的個數。

（1）用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基培養(yǎng)細菌時，培養(yǎng)基中的牛肉膏和蛋白胨能為細菌提供氮源。需要用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶剛剛不燙手，此時培養(yǎng)基已冷卻到50℃左右，可以進行倒平板操作。等待平板冷卻凝固后需要倒置，防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。在添加有伊紅美藍的培養(yǎng)基中，大腸桿菌的菌落呈現深黑色。

（2）用稀釋涂布平板法進行對微生物計數時，當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數，就能推測出樣品大約含有多少活菌，若將水樣稀釋102倍，可取水樣1mL加入到99mL的無菌水中進行稀釋；為了防止雜菌污染，整個操作過程應進行無菌操作，所以在稀釋、過濾和旋轉濾膜等操作時都應該在酒精燈火焰附近進行。（3）統(tǒng)計培養(yǎng)的菌落數目時應選取菌落數目穩(wěn)定時的記錄作為結果，如果經過培養(yǎng)后稀釋倍數為102的4個平板上菌落數分別為43、47、42、48，則平板上平均菌落數=（43+47+42+48）÷4=45個，每毫河水中約含大腸桿菌數=（C÷V）×M=（45÷0.1）×102=4.5×104個，每升河水中約含大腸桿菌數=4.5×104×103=4.5×107個；用稀釋涂布平板法測定的細菌數量比實際活菌數量要少，這是因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的是一個菌落。

（4）從試管中吸出培養(yǎng)液進行計數之前，應將試管輕輕振蕩幾次，采用抽樣檢測的方法，先將蓋玻片放在計數室上，再將吸取的培養(yǎng)液滴于蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液自行滲入計數室，需稍等片刻，待細胞全部沉降到計數室底部時，再將血細胞計數板放在顯微鏡下觀察計數。細菌密度=8.2×100×104×103=8.2×109個。