Question

4．屠呦呦獲得諾貝爾生理學(xué)獎后，最新研究表明，青蒿素還可用于糖尿病的治療．研究人員利用基因工程培育出高產(chǎn)的轉(zhuǎn)基因青蒿．
（1）青蒿的cDNA文庫，是以從青蒿細(xì)胞中提取的mRNA為模板，通過反轉(zhuǎn)錄（方法）建立，該文庫中的基因不含有（填“含有”或“不含有”）啟動子．
（2）基因工程操作的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建．若選擇的限制酶切出的DNA片段是平末端，應(yīng)選擇T₄DNA連接酶進(jìn)行連接．
（3）目的基因的大量擴(kuò)增可以采用PCR技術(shù)，該技術(shù)的原理是DNA（雙鏈）復(fù)制，該技術(shù)中需使用一種特殊的酶是熱穩(wěn)定的DNA聚合酶（Taq酶）．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）cDNA文庫是以mRNA為模板，通過反轉(zhuǎn)錄法建立的；由于啟動子和終止子不能轉(zhuǎn)錄形成mRNA，因此以mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄形成的cDNA中不含有啟動子、終止子等結(jié)構(gòu)．
（2）基因工程操作的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建；根據(jù)酶的來源不同，DNA連接酶分為兩類：E．coliDNA連接酶、T₄DNA連接酶，這二者都能連接黏性末端，此外T₄DNA連接酶還可以連接平末端，但連接平末端時的效率比較低．
（3）PCR技術(shù)可在體外大量擴(kuò)增目的基因，其原理是DNA復(fù)制．PCR在較高溫度下進(jìn)行，因此該技術(shù)中需使用一種特殊的酶是熱穩(wěn)定的DNA聚合酶（Taq酶）．
故答案為：
（1）mRNA    反轉(zhuǎn)錄    不含有
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建      T₄DNA連接酶
（3）PCR        DNA（雙鏈）復(fù)制    熱穩(wěn)定的DNA聚合酶（Taq酶）

點(diǎn)評 本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的概念、原理、操作工具及操作步驟等，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．