Question

18．從自然菌樣篩選較理想生產(chǎn)菌種的一般步驟是：采集菌樣→富集培養(yǎng)→純種分離→性能測定．
（1）不同微生物的生存環(huán)境不同，獲得理想微生物的第一步是從適合的環(huán)境采集菌樣，然后再按一定的方法分離、純化．培養(yǎng)嗜鹽菌的菌樣應(yīng)從海灘等高鹽環(huán)境采集．
（2）富集培養(yǎng)指創(chuàng)設(shè)僅適合待分離微生物生長的特定環(huán)境條件，使其數(shù)量大大增加，從而分離出所需微生物的培養(yǎng)方法．對降解苯酚的微生物的富集培養(yǎng)應(yīng)選擇以苯酚為唯一碳源的培養(yǎng)基．
（3）如圖為分離純化降解苯酚細菌的部分操作步驟．請回答下列問題：

培養(yǎng)基常用滅菌方法是在溫度為121℃條件下，維持15-30min．①是制備培養(yǎng)基時倒平板中的主要操作．完成步驟④的操作，接種共需要6次的灼燒處理．劃線的某個平板經(jīng)培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區(qū)域的第一條線上無菌落，其它劃線上有菌落．造成劃線無菌落可能的操作失誤有接種環(huán)灼燒后未冷卻；劃線未從第一區(qū)域末端開始．
（4）培養(yǎng)一段時間后，在培養(yǎng)基表面形成多個單菌落，不同菌株降解苯酚能力有差異，需要做降解能力的性能測定，為選出降解能力強的菌株，具體思路是：用苯酚含量相同的培養(yǎng)液分別培養(yǎng)各菌株，培養(yǎng)相同時間后測定培養(yǎng)液中苯酸含量．
（5）獲得分解能力強的菌種后，為了臨時保存菌種，把菌種接種在試管的固體斜面培養(yǎng)基上，在合適溫度下培養(yǎng)，等菌落長成后，再放入4℃冰箱保藏．

Answer 1

分析 1、培養(yǎng)基按功能分：

種類	制備方法	特征	用途
選擇培養(yǎng)基	培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)成分	根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率	加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌
鑒別培養(yǎng)基	加入某種試劑或化學(xué)藥品	依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化而設(shè)計	鑒別和區(qū)分菌落相似的微生物伊紅和美藍培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌

2、消毒和滅菌

	消毒	滅菌
概念	使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法	灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌
適用對象	操作空間、某些液體、雙手等	接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等

3、菌種保存

	臨時保存法	甘油管藏法
適用對象	頻繁使用的菌種	長期保存的菌種
培養(yǎng)及類型	固體斜面培養(yǎng)基	液體培養(yǎng)基
溫度	4℃	-20℃
方法	菌落長成后于冰箱中保存，每3～6個月將菌種從舊的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上	將培養(yǎng)的菌液與等體積滅菌后的甘油混合均勻后于冷凍箱內(nèi)保存
缺點	菌種易被污染或產(chǎn)生變異	\\

解答 解：（1）噬鹽菌的菌樣應(yīng)從高鹽環(huán)境采集，如高鹽海灘等．
（2）目的微生物能夠產(chǎn)生降解苯酚，說明其碳源是苯酚，篩選菌株時應(yīng)選擇以苯酚為唯一碳源的培養(yǎng)基．
（3）培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌法，該滅菌方法是在溫度為121℃條件下，維持15-30min；①是制備培養(yǎng)基時倒平板中的主要操作；平板劃線時，每次劃線前都要進行灼燒，最后一次劃線結(jié)束也要進行灼燒，因此完成步驟④的操作共需要6次的灼燒處理；劃線的某個平板經(jīng)培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區(qū)域的第一條線上無菌落，其它劃線上有菌落．造成劃線無菌落可能的操作失誤有接種環(huán)灼燒后未冷卻；劃線未從第一區(qū)域末端開始．
（4）選出降解能力強的菌株的方法：用苯酚含量相同的培養(yǎng)液分別培養(yǎng)各菌株，培養(yǎng)相同時間后測定培養(yǎng)液中苯酸含量．
（5）臨時保存菌種時要把菌種接種在試管的固體斜面培養(yǎng)基上，在合適溫度下培養(yǎng)，等菌落長成后，再放入4℃冰箱保藏．
故答案為：
（1）海灘等高鹽
（2）以苯酚為唯一碳源
（3）121      倒平板    6     接種環(huán)灼燒后未冷卻；劃線未從第一區(qū)域末端開始
（4）用苯酚含量相同的培養(yǎng)液分別培養(yǎng)各菌株，培養(yǎng)相同時間后測定培養(yǎng)液中苯酸含量
（5）固體斜面

點評 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識記培養(yǎng)基的成分、種類及功能；識記無菌技術(shù)及實例；識記保藏菌種的兩種方法；掌握平板劃線法接種時需要注意的細節(jié)問題，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題．